Kitobni o'qish: «Интерпретация результатов лабораторных исследований»

© Коллектив авторов, 2024

Маркеры системного воспаления у больных с впервые выявленным туберкулезом легких, перенесших COVID-19 (Абдуллаев Р.Ю., Шорохова В.А., Комиссарова О.Г.)

Абдуллаев Р. Ю.¹, Шорохова В. А.¹, Комиссарова О. Г.^{1, 2}

¹ ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», г. Москва

² ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова», г. Москва

Abdullaev R. Yu., Shorokhova V. A., Komissarova O. G.

MARKERS OF SYSTEMIC INFLAMMATION IN PATIENTS WITH FIRST DETECTED PULMONARY TUBERCULOSIS WHO HAVE COVID-19

У больных COVID-19 развивается системное воспаление с ростом уровня реактантов острой фазы и изменениями в показателях клинического анализа крови. Развитие туберкулезного процесса также сопровождается изменениями лабораторных показателей системного воспаления. Представляет интерес изменение реактантов острой фазы воспаления при развитии вновь выявленного туберкулезного процесса после перенесенной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 легкой, средней и тяжелой степени.

Цель: сравнить уровень реактантов острой фазы и показателей клинического анализа крови у впервые выявленных больных туберкулезом легких, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 легкой, средней и тяжелой степени тяжести, а также не перенесших COVID-19.

Проведено ретроспективное исследование 90 больных впервые выявленным туберкулезом легких, которые были разделены на 3 группы: 30 пациентов, перенесшие инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 средней и тяжелой степени тяжести, 30 – легкой степени тяжести и 30 – не перенесшие COVID-19. Контрольную группу составили 47 здоровых добровольцев. Изучали частоту изменений показателей С-реактивного белка (СРБ), фибриногена, гемоглобина, лейкоцитов и СОЭ.

В группе больных впервые выявленным туберкулезом легких, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 средней и тяжелой степени тяжести, повышение уровня СРБ встречалось статистически значимо чаще, чем среди больных с легкой степенью тяжести COVID-19 (83,3% и 46,7%; ×2 = 29,89; p = 0,00001), а также по сравнению с больными, не перенесшими COVID-19 (83,3% и 36,7%; ×2 = 44,08; p = 0,00001). Частота встречаемости повышенного уровня фибриногена была значимо выше в группе больных впервые выявленным туберкулезом легких, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 легкой степени тяжести, по сравнению с группой больных, не перенесших COVID-19 (соответственно 50,0% и 20,0%; ×2 = 19,78; p = 0,0001). При тяжелом течении COVID-19 повышение фибриногена наблюдалось в 33,4% случаев, что также было значимо выше по сравнению с пациентами, не перенесшими инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 (соответственно 33,4% и 20,0%; ×2 = 4,97; p = 0,03). Доля больных со сниженным уровнем гемоглобина крови была значимо выше в группе больных впервые выявленным туберкулезом легких, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 средней и тяжелой степени тяжести, по сравнению с группой больных, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 легкой степени и с группой больных, не перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 (23,3% и 6,7%; ×2 = 10,04; p = 0,002 и 23,3% и 3,3%; ×2 = 17,68; p = 0,00003 соответственно). Частота встречаемости лейкоцитоза в сравниваемых группах пациентов значимо не различалась. Повышение уровня СОЭ значимо чаще отмечалось в группе больных, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 легкой тяжести, по сравнению с больными, не перенесшими COVID-19 (33,3% и 20,0% соответственно; ×2 = 4,33; p = 0,05). Частота повышения показателя СОЭ у больных, перенесших инфекцию, вызванную SARS-CoV-2 средней и тяжелой степени тяжести, составила 36,7%, что также было значимо выше по сравнению с пациентами, не перенесшими COVID-19 (соответственно 36,7% и 20,0%; ×2 = 7,09; p = 0,011).

Заключение. Развитие впервые выявленного туберкулезного процесса у больных после перенесенной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 средней и тяжелой степени тяжести, чаще сопровождается выраженным системным воспалением по сравнению с больными, перенесшими COVID-19 легкой степени тяжести, и не перенесшими COVID-19.

Развитие лидерства в управлении клинико-диагностической Лабораторией: стратегии и подходы (Абрамова О.А., Федорова М.М., Ройтман А.П., Годков М.А.)

Абрамова О. А.¹, Федорова М. М.², Ройтман А. П.², Годков М. А.^{2, 3}

¹ ФГААО ВО «Национальный исследовательский университет «Высшая школа экономики»

² ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России

³ ГБУЗ НИИ СП им. Н. В. Склифосовского ДЗМ

Abramova O. A., Fedorova M. M., Roytman A. P., Godkov M. A.

DEVELOPMENT OF LEADERSHIP IN THE MANAGEMENT OF A CLINICAL-DIAGNOSTIC LABORATORY: STRATEGIES AND APPROACHES

Цель: представить стили лидерства в управлении КДЛ.

Выбор стиля лидерства зависит от целей, задач и особенностей медицинской организации. Хорошие руководители стремятся быть лидерами, а лидеры нуждаются в управленческом мастерстве для большей эффективности.

Трансформационное лидерство является эффективным подходом для развития инноваций и создания командной работы. Трансформационный лидер использует свои навыки, чтобы создать стимулирующую и продуктивную рабочую среду, в которой сотрудникам удается почувствовать свою важность для достижения успеха организации. Он может мотивировать людей работать усерднее, зарабатывать больше и реализовывать себя в процессе движения к целям организации.

Авторитарный (директивный, транзакционный) стиль лидерства означает, что руководитель принимает все решения самостоятельно и устанавливает задачи для своих подчиненных без их участия. Этот стиль часто используется в ситуациях кризиса, когда требуется быстрое и единообразное решение. Однако он может вызывать напряжение и неудобства в коллективе, так как сотрудники не имеют возможности высказать свое мнение и не считаются активными участниками в рабочем процессе. Авторитарный стиль основан на экономическом обмене между руководителем и сотрудниками, где руководитель обещает вознаграждение за выполненную работу и вводит наказание за невыполненную или выполненную не в срок.

Аутентичное лидерство – стиль руководства, который основывается на идентичности, личном опыте и честности лидера. Аутентичный лидер стремится к тому, чтобы его действия и решения соответствовали его убеждениям и ценностям, он готов представить свою личность в качестве примера для других сотрудников. Рост популярности аутентичного лидерства связан с желанием людей лучше понимать себя, следовать своему призванию, найти свою уникальность и создать свой собственный лидерский стиль.

Ситуационное лидерство – ориентирован на адаптацию лидера к различным ситуациям и потребностям его сотрудников. Ситуационный лидер стремится к тому, чтобы организация быстрее адаптировалась к изменяющемуся внешнему контексту. Он способен прочувствовать предстоящие вызовы и быстро приспособить команду к новым реалиям. Социальный интеллект помогает ему понять, какие задачи или проблемы требуется решить, и разработать новую стратегию в соответствии с потребностями всей команды.

Лидерство-служение – руководитель фокусируется на своих сотрудниках и их развитии. Главное внимание руководителя направлено на удовлетворение потребностей и развитие сотрудников. Лидер, следуя этому подходу, активно работает над созданием условий, способствующих росту и успеху каждого члена команды. Сотрудники, в свою очередь, чувствуют глубокую привязанность к такому лидеру и готовы приложить дополнительные усилия в своей работе. Команды, работающие в таких условиях, проявляют высокую степень взаимодействия и сплоченности, наблюдается устойчивое снижение текучести кадров. В таких командах сотрудники чувствуют взаимную поддержку, что позволяет им эффективно преодолевать трудности и достигать лучших результатов.

Распределенный (участливый) стиль лидерства предполагает включение сотрудников в процесс принятия решений, дает им возможность участвовать в определении стратегии достижения общей цели. Лидер проводит консультации и учитывает мнения сотрудников, тем самым повышая автономность сотрудников и их вовлеченность в работу лаборатории.

Коучинговый (консультационный) стиль лидерства – лидер помогает сотрудникам определить цели, разработать план действий и помогает им в его реализации. Такой стиль подходит для организаций, где есть опытные сотрудники, где передача опыта неопытными сотрудниками и обучение являются важными задачами руководителя.

Вывод. Каждый из этих стилей лидерства может быть эффективным в разных ситуациях и зависит от конкретных условий. Лидеры, которые близки к своим сотрудникам и разделяют цели организации, обычно достигают впечатляющих результатов в профессиональной и личной жизни. Сейчас мы наблюдаем стойкий тренд на управление, ориентированное на человека. В связи с этим, демократические стили лидерства становятся все более популярными в медицинских организациях, желающих создавать стабильные, сильные и талантливые команды. Важно понимать, какие преимущества и потенциальные риски несет каждый из описанных стилей лидерства и какие внутренние и внешние факторы нужно учитывать при изменении структуры лаборатории и формировании новой системы управления.

Определение уровня маркеров для объективной оценки эффективности комплексной терапии пароксизмальной формы фибрилляции предсердий (Абрашкина Н.Н., Федорова М.М., Ройтман А.П., Долгов В.В.)

ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования Министерства здравоохранения Российской Федерации

Abrashkina N. N., Fedorova M. M., Roytman A. P., Dolgov V. V.

LEVEL DETECTION OF MARKERS FOR AN OBJECTIVE ASSESSMENT THE EFFECTIVENESS OF PAROXYSMAL ATRIAL FIBRILLATION COMPLEX THERAPY

Высокочувствительный С-реактивный белок (hsCRP), как показатель уровня сосудистого хронического воспаления с возможным повреждением ткани эндотелия, в диапазоне до 10,0 мг/л – отражает уровень кардио-сосудистых осложнений. NT-proBNP, является неактивным свободно циркулирующим в крови N-терминальным продуктом расщепления молекулы – предшественника мозгового натрийуретического пептида proBNP, вырабатываемого кардиомиоцитами в ответ на повышение давления в желудочках сердца.

Цель: определение уровня лабораторных маркеров hsCRP и NT-proBNP в сыворотке крови для оценки эффективности и целесообразности комплексной терапии у пациентов с пароксизмальной формой фибрилляции предсердий (ФП) при ИБС.

После отбора по критериям исключения (инфекционные заболевания, прием препаратов влияющих на лабораторные маркеры в крови) в исследование было включено 65 пациентов с установленной пароксизмальной формой ФП на фоне ИБС без признаков хронической сердечной недостаточности (ХСН), проходящих обследование и лечение в ГБУЗ ГКБ им. В. В. Вересаева ДЗМ. Возраст составил в среднем 65,7 лет (48–88 лет). При поступлении на лечение и по его окончанию проводили ЭКГ в 12 отведениях, эхо-КГ, суточное мониторирование ЭКГ и иммунохимическое определение hsCRP и NT-proBNP в сыворотке крови. Выборка была представлена 39 мужчинами (60%) и 26 женщинами (40%). После восстановления синусового ритма (медикаментозно или после электрической кардиоверсии) пациентам был назначен амиодарон в дозе 600 мг в сутки. Далее, по мере уменьшения частоты сердечных сокращений (ЧСС), увеличения интервала QT, пациенты продолжали прием поддерживающей дозы по 200 мг в сутки, а также триметазидина в дозе 70 мг в сутки. На 56 день от начала лечения пациентов разделили по признаку регистрации пароксизмов при повторном суточном мониторировании ЭКГ. У 40 пациентов отсутствовали признаки ФП, а у 25 пациентов отмечались проявления пароксизмальной формы ФП.

В группе без признаков ФП после курса лечения в среднем диаметр левого предсердия (ЛП) достоверно уменьшился с 43,8 мм до 41,5 мм (р < 0,01). Систолическое давление в легочной артерии (ЛА) снизилось с 29,5 мм рт. ст. до 22 мм рт. ст. (р < 0,01). Фракция выброса (ФВ) до лечения была – 59,4%, после –увеличилась до 61,6%. Исследование показало снижение hsCRP с 2,8 мг/л перед лечением до 2,1 мг/л (р = 0,053) после лечения. Уровень маркера гемодинамического состояния сердца NT-proBNP заметно улучшился: с 704 пг/мл до 135 пг/мл (р < 0,01).

В группе в 25 пациентов, где признаки пароксизмальных проявлений сохранились, диаметр ЛП также достоверно уменьшился до 42,6 мм (р < 0,01). Давление в ЛА также снизилось, хоть и не значительно, – до 26,2 мм рт. ст. (р < 0,01). ФВ не изменилась и составила 61,4% (р = 0,117). Лабораторные исследования обоих маркеров показали достоверное снижение уровня: до 1,8 мг/л (р < 0,01) hsCRP и до 65,6 пг/мл (р < 0,01) NT-proBNP.

Заключение. Результаты показали эффективность применения триметазидина в статистически достоверном уменьшении диаметра ЛП, давления в ЛА, объема фракции выброса для 62% (n = 40) выборки пациентов, что подтвердило также снижение уровня NT-proBNP. У остальных 38% (n = 25) пациентов, несмотря на сохранение фракции выброса и проявлений пароксизмов, но достоверное снижение уровня маркеров в крови и других функциональных показателей сердца, можно констатировать благоприятный эффект выбранной тактики лечения амиодароном совместно с триметазидином.

Лабораторная диагностика пневмоцистной и вирусной инфекций у больных немелкоклеточным раком легкого (Агинова В.В., Григорьевская З.В., Петухова И.Н., Багирова Н.С.)

ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, г. Москва

Aginova V. V., Grigorievskaya Z. V., Petukhova I. N., Bagirova N. S.

LABORATORY DIAGNOSTICS OF PNEUMOCYSTIC AND VIRAL INFECTIONS IN PATIENTS WITH NON-SMALL CELL LUNG CANCER

Цель: изучить видовой состав и частоту встречаемости возбудителей оппортунистических инфекций у онкологических больных с диагнозом «немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ)», получающих химиотерапевтическое лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России.

В проспективное открытое одноцентровое исследование включена когорта пациентов 18 лет и старше с местнораспространенным или метастатическим НМРЛ, получающих лекарственную противоопухолевую терапию. Проводили поиск оппортунистических инфекций следующей этиологии: Pneumocystis jirovecii, вирус простого герпеса I и II типа (ВПГ-1, ВПГ-2), цитомегаловирус (ЦМВ), вирус Эпштейна–Барр (ВЭБ), вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) и их сочетаний. Диагностику и анализ результатов проводили в соответствии с алгоритмом диагностики герпесвирусных инфекций и пневмоцистоза, разработанным в лаборатории эпидемиологии оппортунистических инфекций ФГБУ «НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» Минздрава России. Для выявления антител классов M и G к герпесвирусам и пневмоцистам были исследованы образцы сывороток периферической крови методом ИФА. Исследование включало определение титров указанных антител к пневмоцистам, ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ, ВГЧ-6. Для обнаружения антигенов герпесвирусов исследовали лейкоциты периферической крови. Определение общих антигенов герпесвирусов проводили методом непрямой реакции иммунофлюоресценции (НРИФ). P. jirovecii определяли морфологическим методом и НРИФ. Для установления стадии заболевания применяли комплексное определение маркеров.

Антитела к герпетическим вирусам и/или пневмоцистам были выявлены у больных (n=18) с диагнозом НМРЛ в 100% случаев. Титры антител, соответствующие активной инфекции, были более характерны для ВЭБ и ЦМВ, при этом маркеры ЦМВ-инфекции чаще регистрировали в титрах, соответствующих острой стадии заболевания, а ВЭБ – в стадии реактивации без явных клинических проявлений. В большинстве случаев определялось смешанное инфицирование различными возбудителями: сочетание ВПГ-1 + ВЭБ + ЦМВ обнаружено у 10 больных НМРЛ; ВПГ-1 + ВЭБ + ЦМВ + ВГЧ-6 – у 6 больных; ВПГ-1 + ВПГ-2 + ВЭБ + ЦМВ – у 1 больного; ВПГ-1 + ВПГ-2 + ВЭБ + ЦМВ + ВГЧ-6 – также у 1 пациента. При исследовании БАЛ у 3 из 7 обследованных пациентов были выявлены пневмоцисты.

Проведенное пилотное исследование обозначило важную проблему наличия оппортунистических инфекций, в частности, герпесвирусных инфекций (ГВИ) у больных НМРЛ, особенностями которых являются рецидивирующее течение, диссеминированные формы болезни, плохо поддающиеся лечению. Они могут осложнять течение онкологического заболевания и затруднять проведение противоопухолевого лечения. Пневмоцистная инфекция характерна для больных с иммуносупрессией, что определяет уязвимость онкологических пациентов к данному оппортунисту. Оценка наличия оппортунистических инфекций у онкологических больных может дать значимую информацию, необходимую для эффективного противоопухолевого и антимикробного лечения, что должно быть учтено в комплексном обследовании пациента.

Микробиологическое разнообразие камней почечной лоханки у пациентов с мочекаменной болезнью (Акрамова Э.Р., Пушкарев А.М., Газизуллина Г.Р., Сабирзянов С.Ш., Хакимова Л.Р., Гимранова И.А.)¹

Акрамова Э. Р.¹, Пушкарев А. М.^{1, 2}, Газизуллина Г. Р.¹, Сабирзянов С. Ш.^{1, 2}, Хакимова Л. Р.¹, Гимранова И. А.¹

¹ ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Уфа

² ГБУЗ «Республиканская клиническая больница имени Г. Г. Куватова», г. Уфа

Akramova E. R., Pushkarev A. M., Gazizullina G. R., Sabirzyanov S. Sh., Khakimova L. R., Gimranova I. A.

MICROBIOLOGICAL DIVERSITY OF RENAL PELVIS STONES IN PATIENTS WITH UROLITHIASIS

Цель: изучение видового состава микроорганизмов, выделенных из камней почечной лоханки у пациентов урологического отделения.

В качестве исходных данных для исследования был использован анализ бактериологического обследования камней, извлеченных оперативно из почечных лоханок 32 пациентов в возрасте от 29 до 69 лет урологического отделения ГБУЗ РКБ им. Г. Г. Куватова (г. Уфа). У всех пациентов отмечались односторонние камни почек. Для исследования были применены стандартные бактериологические методы, а также масс-спектрометрический метод идентификации с использованием матричной активации, лазерной десорбции/ионизации (MALDI-TOF MS) (Autof MS, Китай).

У больных нефролитиазом в камнях лоханочной области почки обнаруживается широкий спектр микроорганизмов. В результате нашего бактериологического исследования у 21 пациента обнаружены как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии, у 11 роста микроорганизмов на питательных средах не выявлено. Были идентифицированы представители 13 родов и 20 видов. Среди них преобладали грамположительные бактерии родов Micrococcus (M. luteus), Streptococcus (S. anginosus), Corynebacterium (C. amycolatum), Bacillus (B. brevis, B. cereus), Staphylococcus (S. epidermidis, S. capitis, S. hominis, S. warneri, S. haemolyticus), а также бактерии кишечной группы – грамположительные Enterococcus (E. faecalis, E. faecium) и грамотрицательные бактерии Escherichia coli. Кроме того, были выявлены грамотрицательные виды бактерий, такие как Lactobacillus fermentum, Klebsiella pneumoniae, Salmonella sp. А среди редко встречаемых микроорганизмов – грамположительные кокки Kocuria rosea и Brachybacterium paraconglomeratum, грибы Candida albicans и Alternaria alternata.

Заключение. Этиологическая структура микроорганизмов, высеваемая из камней лоханочной области почек взрослых пациентов разнообразна. Основными патогенами мочекаменной болезни считаются представители родов Enterococcus, Escherichia, Micrococcus, Staphylococcus, которые также были обнаружены у пациентов в данном исследовании.

Диагностическое значение методов выявления антител к ядерным белкам SP100 и GP210 в сыворотках больных первичным билиарным холангитом и перекрестным синдромом (Александрова Е.Н., Дорофеев А.С., Новиков А.А., Сандлер Ю.Г., Салиев К.Г., Гудкова Р.Б., Винницкая Е.В.)

ГБУЗ «Московский клинический научно-практический центр имени А. С. Логинова Департамента здравоохранения города Москвы», г. Москва

Aleksandrova E. N., Dorofeev A. S., Novikov A. A., Sandler Yu.G., Saliev K. G., Gudkova R. B., Vinnitskaya E. V.

DIAGNOSTIC VALUE OF METHODS FOR DETECTION OF ANTIBODIES TO NUCLEAR PROTEINS SP100 AND GP210 IN SERUM OF PATIENTS WITH PRIMARY BILIARY CHOLANGITIS AND OVERLAP SYNDROME

Антитела к ядерному антигену sp100 и интегральному мембранному белку gp210 ядерных пор служат специфическими иммунологическими маркерами первичного билиарного холангита (ПБХ). В непрямой реакции иммунофлюоресценции на HEp-2 клетках (НРИФ-НЕр-2) антителам к sp100 соответствует паттерн АС-6 (множественные точки в ядре), антителам к gp210 – паттерн АС-12 (ядерное мембранное точечное свечение). Для выявления антител к sp100 и gp210 у пациентов с положительными результатами НРИФ-НЕр-2 используются подтверждающие методы твердофазного иммунного анализа (иммуноферментный анализ, иммуноблот – ИБ).

Цель: сравнить диагностическую ценность НРИФ-НЕр-2 и ИБ для определения антител к sp100 и gp210 в сыворотках больных ПБХ и перекрестным синдромом (ПБХ в сочетании с аутоиммунным гепатитом – АИГ).

Исследованы сыворотки 19 больных ПБХ (18 женщин и 1 мужчина) в возрасте 51,4 (25–72) лет и 48 больных ПБХ/АИГ (44 женщины и 4 мужчины) в возрасте 53,6 (28–70) лет. Группу сравнения составили 30 больных неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП), контрольную группу – 30 здоровых доноров (ЗД). Диагнозы ПБХ и ПБХ/АИГ были установлены в соответствии с международными диагностическими критериями и подтверждены результатами морфологического исследования биоптатов печени. Определение антител к sp100 и gp210 осуществлялось методами НРИФ-НЕр-2 с использованием тест системы ImmuGlo HEp-2-Cell Anti-Nuclear Antibodi IFA Kit (Immco Diagnostics, США) визуальной оценкой образцов флюоресценции под микроскопом AXIOSKOP 40 («Zeiss», Германия) и ИБ при помощи коммерческого набора реагентов «Liver-9-line» («Orgentec», ФРГ) с программным обеспечением «VIZION». Результаты представлены в виде медианы (Ме) (25-й – 75-й перцентили). Для измерения степени согласованности результатов исследования антител к sp100 и gp210 разными методами использовали коэффициент каппа (æ) Коэна. Оценку диагностической ценности методов выявления антител к sp100 и gp210 выполняли путем расчета диагностической чувствительности и специфичности (ДЧ и ДС), отношения правдоподобия положительного и отрицательного результата теста (ОППР и ОПОР).

Результаты. У больных ПБХ/АИГ частота обнаружения антител к sp100 превышала данный показатель среди ЗД при использовании обоих методов иммунного анализа (НРИФ-HEp-2 и ИБ) (20,8% и 16,7% vs 0%, p < 0,05). В сыворотках больных ПБХ и ПБХ/АИГ отмечено увеличение концентрации антител к sp100, выявляемых методом ИБ, по сравнению с группой ЗД (0,7; 0,05–4,44 у. е. и 0,4; 0,03–3,42 у. е. vs 0,07; 0,03–0,12 у. е., p < 0,05). Наблюдалась «слабая» степень согласованности результатов исследования антител к sp100 методами НРИФ-HEp-2 и ИБ (æ=0,37). При ПБХ и ПБХ/АИГ обнаружение антител к sp100 методами НРИФ-НЕр-2 и ИБ отличалось низкой ДЧ (10,6–20,8%), высокой ДС (96,7–98,3%) и хорошей диагностической эффективностью (ОППР от 3,16 до 10,0 и выше).

При использовании НРИФ-HEp-2 антитела к gp210 в сыворотках больных ПБХ и ПБХ/АИГ не выявлялись. Отсутствие диагностической эффективности определения антител к gp210 методом НРИФ-HEp-2 у больных ПБХ и ПБХ/АИГ может быть связано с маскировкой паттерна АС-12 другими типами ядерного и цитоплазматического свечения, а также особенностями используемой культуры HEp-2 клеток в качестве субстрата. С помощью ИБ установлено повышение частоты обнаружения антител к gp210 при ПБХ/АИГ (14,6%) относительно больных ПБХ (5,3%), НАЖБП (3,3%) и ЗД (0%) (р < 0,05 во всех случаях), а также увеличение концентрации данных антител у больных ПБХ и ПБХ/АИГ по сравнению с ЗД (0,25; 0,02–3,41 у. е. и 0,48; 0,03–4,04 у. е. vs 0,07; 0,04–0,12 у. е., p < 0,05). При ПБХ и ПБХ/АИГ выявление антител к gp210 методом ИБ характеризовалось низкой ДЧ (5,3–14,6%), высокой ДС (98,3%) и хорошей диагностической точностью (ОППР: 3,2–8,75).

Заключение. Комбинированные исследования антител к sp100 и gp210 с помощью НРИФ-НЕр-2 и ИБ целесообразно использовать в качестве дополнительных лабораторных тестов при серонегативных по антимитохондриальным антителам вариантах ПБХ и перекрестного синдрома ПБХ/АИГ.

Новые критерии лабораторной диагностики антифосфолипидного синдрома (Александрова Е.Н., Новиков А.А., Лукина Г.В.)

ГБУЗ «Московский клинический научно-практический центр имени А. С. Логинова Департамента здравоохранения города Москвы», г. Москва

Aleksandrova E. N., Novikov A. A., Lukina G. V.

NEW CRITERIA FOR LABORATORY DIAGNOSIS OF ANTIPHOSPHOLIPID SYNDROME

Антифосфолипидный синдром (АФС) – системное аутоиммунное заболевание, характеризующееся рецидивирующими тромбозами (артериальными и/или венозными), акушерской патологией и синтезом антифосфолипидных антител (аФЛ), включая волчаночный антикоагулянт (ВА), и/или антитела к кардиолипину (аКЛ) классов IgG/IgM, и/или антитела к β2-гликопротеину I (аβ2-ГП I) классов IgG/IgM. Новые международные классификационные критерии (ACR/EULAR, 2023), использующиеся для диагностики АФС, отличаются от предыдущих (Саппоро, 2006) выделением обязательного «входящего» критерия, который содержит хотя бы один клинический признак (подтвержденный медицинскими документами) в сочетании с положительным результатом исследования аФЛ (обнаружением ВА или средних – от 40 до 79 ЕД либо высоких ≥ 80 ЕД уровней IgG/IgM аКЛ или IgG/IgM аβ2-ГП I в крови) в течение 3 лет после выявления клинического симптома. При наличии «входящего» критерия используют дополнительные критерии с оценкой в баллах (в диапазоне от 1 до 7 баллов каждый), которые подразделяются на 8 доменов (D): 6 клинических (D1-D6) (макроваскулярные венозные тромбоэмболические нарушения, макроваскулярные артериальные тромбозы, микроваскулярные нарушения, акушерская патология, поражение клапанов сердца, гематологические нарушения – тромбоцитопения) и 2 лабораторных (D7-D8) домена. К лабораторным доменам относят:

D7 – выявление ВА в функциональных коагуляционных тестах (положительный ВА однократный – 1 балл; положительный ВА персистирующий, с обнаружением в 2 и более исследованиях с интервалом не менее 12 недель – 5 баллов).

D8 – персистирующее выявление IgG/IgM аКЛ и/или IgG/IgM аβ2-ГП I методом иммуноферментного анализа (ИФА) в 2 и более исследованиях с интервалом не менее 12 недель (умеренно позитивные от 40 до 79 ЕД или высоко позитивные ≥80 ЕД уровни IgM аКЛ и/или IgM аβ2-ГП I – 1 балл; умеренно позитивные от 40 до 79 ЕД уровни IgG аКЛ и/или IgG аβ2-ГП I – 4 балла; высоко позитивные ≥80 ЕД уровни IgG аКЛ или IgG аβ2-ГП I – 5 баллов; высоко позитивные ≥80 ЕД уровни IgG аКЛ и IgG аβ2-ГП I – 7 баллов.

В рамках каждого домена учитывается критерий с наибольшим количеством баллов; для постановки диагноза АФС следует набрать не менее 3 баллов из клинических и не менее 3 баллов из лабораторных доменов. Исследование ВА в фосфолипидзависимых коагуляционных тестах должно выполняться и интерпретироваться на основе рекомендаций Международного общества тромбозов и гемостаза (International Society of Thrombosis and Haemostasis – ISTH). Для подтверждения присутствия ВА необходима трехэтапная процедура (скрининг – исследование смешивания – подтверждение) с использованием 2 скрининговых тест-систем (времени свертывания плазмы с разведенным ядом гадюки Рассела – dRVVT и чувствительного АЧТВ с диоксидом кремния и низким содержанием фосфолипидов в качестве активатора). ВА считается положительным, если хотя бы одна из двух тест-систем дает положительный результат после всех трех этапов. Результаты тестирования ВА следует интерпретировать с осторожностью, поскольку во время приема антикоагулянтов могут возникать ложноположительные и отрицательные результаты. IgG/IgM аКЛ должны выявляться в сыворотке в средних (40–79 ЕД) или высоких (≥80 ЕД) концентрациях в 2 и более исследованиях с интервалом не менее 12 недель с помощью стандартного ИФА, позволяющего выявлять β2 – ГП I-зависимые аКЛ. IgG/IgM аβ2-ГП I должны определяться в сыворотке в средних (40–79 ЕД) или высоких (≥80 ЕД) концентрациях в 2 и более исследованиях с интервалом не менее 12 недель с помощью стандартного ИФА. С целью получения сопоставимых результатов не следует смешивать разные аналитические платформы при исследовании IgG/IgM аКЛ и IgG/IgM аβ2-ГП I. Для определения IgG/IgM аКЛ и IgG/IgM аβ2-ГП I не рекомендуется применять иные, кроме стандартного ИФА, методы твердофазного иммунного анализа (иммуноблот, новые автоматизированные методы хемилюминисцентного и мультиплексного иммунного анализа) из-за крайне низкой степени согласованности умеренно/высокопозитивных результатов тестирования.

Классификационные критерии АФС ACR/EULAR2023 имеют более высокую диагностическую специфичность (99% vs 86%) и более низкую диагностическую чувствительность (84% vs 99%) по сравнению с международными классификационными критериями АФС Саппоро 2006 г.

Исследование воздействия низкочастотных акустических колебаний на изменение концентрации биохимических маркеров повреждения тканей (Алексеева А.С., Алекперов С.И., Сажнев А.Н., Степанов А.В.)

ФГБУ «Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины» МО РФ, г. Санкт-Петербург

Alekseeva A. S., Alekperov S. I., Sazhnev A. N., Stepanov A. V.

STUDY OF THE INFLUENCE OF LOW-FREQUENCY ACOUSTIC OSCILLATIONS ON THE CONCENTRATION OF THE TISSUE ALTERATION BIOCHEMICAL MARKERS

Заболеваемость лиц, подвергающихся профессиональному воздействию низкочастотных акустических колебаний (НЧАК), обусловлена его способностью вызывать структурно-функциональные изменения практически во всех органах и системах организма.

Цель: оценить воздействия НЧАК на организм и головной мозг по появлению в крови лабораторных маркеров выраженной воспалительной реакции поражения ткани мозга.

Концентрация СРБ после воздействия НЧАК возросла у 62% добровольцев через 1 час, а достоверное снижение наблюдалось через 6 часов. Увеличение содержания фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) отмечали через 6 и 24 часа. Наиболее заметные изменения концентрации N-концевого предшественника натрийуретического пептида (NTproBNP) наблюдали на сроке 6 часов после воздействия. Изменения содержания моноцитарного хемотаксического белка-1 (МСР-1) не наблюдали. Через 3 часа после воздействия концентрация общего белка в крови добровольцев снизилась на 20% и далее снижалась через 6 и 24 часа. Концентрация альбумина снизилась на 14% через час после воздействия и продолжала снижаться через 3 и 6 часов. Снижение уровня альбумина обычно происходит на фоне обширных повреждений мягких тканей, а также при увеличении количества жидкости в организме в целом и в крови в частности. Уменьшение содержания белка в плазме может наступить в результате задержки воды при сердечной декомпенсации. Уровень глюкозы через час после воздействия имел тенденцию к повышению (на 7%), далее снижался в течение суток, что может быть связано с компенсаторными механизмами после стрессового воздействия. Не наблюдалось заметных изменений концентрации креатинкиназы, мочевой кислоты, АЛТ и АСТ. Содержание щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, билирубина увеличилось к 24 часам после воздействия. Повышение в крови указанных маркеров говорит о реакции организма на воздействие. Содержание триглицеридов снизилось на 12% через час после воздействия и продолжало снижаться в течение суток. Концентрация оксида азота значительно (в несколько десятков раз) повысилась через час и 3 часа, через 6 и 24 часа снизилась, но была значительно выше фона. Известно, что продукция оксида азота возрастает при черепно-мозговой травме за счет активности индуцибельной NO-синтазы.

Заключение. Лабораторные маркеры показали тенденцию к повышению концентрации после воздействия НЧАК, что подтверждает положение о повреждающем воздействии на организм в целом и мозг акустического (шумового) фактора. Перспективными для дальнейших исследований представляются СРБ, VEGF, ЛДГ и оксид азота.

Витамины D, B₁₂ и гомоцистеин при хроническом атрофическом гастрите у участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС с метаболическим синдромом (Алхутова Н.А., Ковязина Н.А.)

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А. М. Никифорова МЧС России, г. Санкт-Петербург

Alkhutova N. A., Kovyazina N. A.

VITAMINS D, B₁₂ AND HOMOCYSTEINE IN CHRONIC ATROPHIC GASTRITIS IN PARTICIPANTS IN THE LIQUIDATION OF THE CONSEQUENCES OF THE CHERNOBYL ACCIDENT WITH METABOLIC SYNDROME

У участников ликвидации последствий аварии (ЛПА) на Чернобыльской АЭС при обследовании в ФГБУ ВЦЭРМ им. А. М. Никифорова МЧС России в 2007–2020 годах установлен факт более высокой частоты хронического атрофического гастрита (ХАГ) относительно лиц группы сравнения. При наличии метаболического синдрома (МС) клинические проявления ХАГ характеризовались нечеткостью и разнообразием, что обусловливалось сочетанной, полиорганной патологией. В то же время известно, что с увеличением стадии ХАГ в 5–6 раз увеличивается вероятность развития аденокарциномы желудка. В последние годы все чаще высказывается мнение о повышенной вероятности развития рака желудка и частоте встречаемости аутоиммунной патологии на фоне дефицита витамина B₁₂. Установлено, что степень снижения уровня витамина B₁₂ пропорциональна увеличению концентрации гомоцистеина в крови. Опубликованы данные о значительном снижении уровня витамина D у пациентов с ХАГ. Следовательно, концентрацию в крови витаминов D и В₁₂ следует также рассматривать в качестве потенциальных лабораторных маркеров состояния слизистой оболочки желудка у ЛПА.

Цель: выявить лабораторные маркеры сочетанного течения хронического атрофического гастрита и метаболического синдрома у ЛПА.

Обследовали 97 ЛПА (65,4 ± 1,1 лет), прошедших в 2019–2020 годах клинико-лабораторное обследование в ФГБУ ВЦЭРМ им. А. М. Никифорова МЧС России. В группу сравнения вошли мужчины, не получавшие профессиональную лучевую нагрузку и не имеющие онкологических и острых соматических заболеваний. Обследованные были разделены на группы с наличием и отсутствием МС. Количественное определение концентрации пепсиногена-I (PGI), пепсиногена-II, гастрина-17 (G-17) и H. pylori-IgG в плазме крови проводили иммуноферментным методом с использованием комплекса системы реагентов «Гастропанель» (BIOHIT, Финляндия). Иммунохемилюминесцентным методом определили в сыворотке крови витамина D (Access 2, Beckman Coulter, США), витамина B₁₂ (UniCel DxI, Beckman Coulter, США) и гомоцистеина (Immulite 2000 XPI, Siemens, США). Статистический анализ проводили с помощью программы «Statistica 10.0».

На основании лабораторной оценки «Гастропанель» частота выявления ХАГ была выше у ЛПА при наличии МС. Частота выявления ХАГ у лиц группы сравнения также удваивалась при наличии МС. У ЛПА в 25,3% случаев был обнаружен дефицит витамина B₁₂, подтвержденный повышением уровня гомоцистеина. У ЛПА с МС и дефицитом витамина В₁₂ в 57,1% случаев уровень PGI был ниже 70 мкг/л. На фоне дефицита витамина В₁₂ при наличии МС содержание к крови G-17 удваивалось, а медиана концентраций G-17 составила 25,2 пмоль/л. У ЛПА с фундальным ХАГ в отсутствие МС содержание витамина B₁₂ и гомоцистеина находилось в границах референтного интервала. Напротив, 70% случаев у ЛПА с фундальным ХАГ и наличием МС выявили сочетание дефицита витамина B₁₂, гипергомоцистеинемию, PGI < 30 мкг/л, G-17 >30 пмоль/л, PGI/PGII < 3. У большинства ЛПА с антральным ХАГ содержание в сыворотке крови гомоцистеина и витамина B₁₂ находилось в пределах референтного диапазона. У ЛПА с атрофическими изменениями слизистой оболочки тела желудка содержание витамина D было недостаточным независимо от наличия у них МС. Уровень витамина D у ЛПА с антральным ХАГ без МС соответствовал достаточному количеству, в то время как при наличии МС отмечался недостаток витамина D близкий к дефициту.

Выводы. Лабораторные маркеры выявили хронический атрофический гастрит чаще при наличии МС как у ЛПА, так и у лиц группы сравнения. Наличие МС и дефицит витамина В₁₂ являются факторами, ассоциированными с большей выраженностью лабораторных признаков атрофических изменений слизистой оболочки тела желудка у ЛПА. В алгоритм клинико-лабораторного наблюдения за состоянием здоровья ЛПА с наличием МС и ХАГ следует включать определение уровня витамина В₁₂, витамина D и гомоцистеина.

Интерпретация маркеров регуляции костного метаболизма в аспекте общего адаптивного ответа (Алхутова Н.А., Ковязина Н.А., Рыбников В.Ю.)

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А. М. Никифорова МЧС России, г. Санкт-Петербург

Alkhutova N. A., Kovyazina N. A., Ribnikov V. Yu.

INTERPRETATION OF MARKERS OF BONE METABOLISM REGULATION IN THE ASPECT OF GENERAL ADAPTIVE RESPONSE

Специфическим маркером остеосинтеза является остеокальцин. Увеличение продукции остеокальцина в ответ на стрессовую нагрузку является быстродействующим физиологическим адаптивным механизмом, а относительно костно-мышечной системы этот гормон выступает в роли антагониста кортизола. Большое значение в процессах ремоделирования костной ткани отведено витамину D, который стимулирует выработку остеокальцина, регулирует кальциево-фосфорный обмен и влияет на регенерацию кости.

Цель: поиск и установление лабораторных маркеров истощения остеокальцин-опосредованных механизмов адаптации.

Обследовали 119 мужчин, сотрудников ФПС ГПС МЧС России, прошедших в 2023 году клинико-лабораторное обследование в ФГБУ ВЦЭРМ им. А. М. Никифорова МЧС России. Иммунохемилюминесцентным методом определяли в сыворотке крови паратгормон, остеокальцин, инсулин, кортизол, дегидроэпиандростерон-сульфат (ДГЭАС), витамин D. Во второй порции утренней мочи иммунохемилюминесцентным методом определили концентрацию дезоксипиридинолина (DPD).

В 82% случаев уровень витамина D был недостаточным, в том числе в 28% – дефицитным (< 50 пмоль/л). У 25% всех обследованных и более чем у 50% сотрудников ФПС ГПС с дефицитом витамина D наблюдали повышение уровня DPD в моче. Концентрация остеокальцина и ПТГ у обследованных с дефицитом и без дефицита витамина D не различалась. Группы с наличием и без наличия нарушений опорно-двигательной системы не различались по возрасту и индексу массы тела (ИМТ). Тем не менее, для здоровых лиц была характерна относительно более низкая концентрация инсулина (р < 0,05) и более высокая чувствительностью к инсулину, оцененная по индексу НОМА (p < 0,01). Эти изменения носили исключительно относительный характер, а все значения показателей находились внутри референтного диапазона. Тем не менее, учитывая характер выявленных жалоб и особенности профессиональной нагрузки обследованных лиц, допустимо предположить, что выявленные особенности обусловлены снижением интенсивности физиологических механизмов остеокальцин-опосредованной адаптации в группе с нарушениями опорно-двигательной системы. Так, соотношение концентрации остеокальцина к инсулину было выше (p < 0,01) в группе без наличия жалоб. Полученные данные согласуются с современными представлениями об остеокальцине как гормоне с анаболическим действием, усиливающим чувствительность органов-мишеней к глюкозе, пик концентрации которого в крови в физиологическом равновесии приходится на минимум концентрации инсулина. Тенденция к снижению остеокальцина и индекса остеокальцин/инсулин была также выявлена сотрудников по мере увеличения стажа их службы и возраста. Так, у лиц со стажем до 5 лет уровень остеокальцина был сопоставим с медианой референтного диапазона (19,8 нг/мл) и значительно снижался у сотрудников со стажем более 15 лет. Случаи превышения референтных пределов уровня остеокальцина были выявлены только в группе с индексом ДГЭАС/кортизол от 1,1 до 2,1 – в фазе расходования адаптационных резервов.

Заключение. Выявленные клинико-лабораторные взаимосвязи согласуются с современными теоретическими представлениями о регуляции костного метаболизма и участии костно-мышечной системы в механизмах общего адаптивного ответа. Предложенные критерии оценки уровня витамина D, индекса остеокальцин/инсулин и индекса ДГЭАС/кортизол могут быть использованы в программах профилактических мероприятий, направленных на сохранение здоровья сотрудников ФПС ГПС МЧС России и коррекцию адаптивных сдвигов равновесия костного обмена, обусловленных образом жизни и профессиональной нагрузкой.

Результаты теста ДНК-комет. Описание клинического случая (Антакова Л.Н., Котова Ю.А., Шишкина В.В., Анохина Ю.М., Герасимова О.А., Ким О.Л.)

Антакова Л. Н.¹, Котова Ю. А.¹, Шишкина В. В.¹, Анохина Ю. М.¹, Герасимова О. А.¹, Ким О. Л.²

¹ ФГБОУ ВО «Воронежский государственный медицинский университет имени Н. Н. Бурденко» Минздрава России, г. Воронеж

² БУЗ ВО «Воронежская городская поликлиника № 10» Корпус № 6, г. Воронеж

Antakova L. N., Kotova Yu.A., Shishkina V. V., Anokhina Yu.M., Gerasimova O. A., Kim O. L.

RESULTS OF DNA “COMET ASSAY”. CLINICAL CASE REPORT

Метод ДНК-комет – быстрый и чувствительный тест, предназначенный для обнаружения повреждений ДНК.

Цель. Представить анализ теста ДНК-комет с помощью бесплатной программы CometScore, в которой профили «головы» и «хвоста» комет быстро визуализируются с использованием изображений, данные экспортируются в таблицу.

Исследование проводили на базе НИИ экспериментальной биологии и медицины Воронежскогой медицинского университета в рамках НИИ (протокол локального этического комитета № 7 от 19.10.2023). Образец крови исследовали в качестве образца контрольной группы спустя 3 недели после перенесенной COVID-19 инфекции, лабораторно подтвержденной. На момент проведения теста ДНК-комет жалоб не было, общий анализ крови соответствовал норме, индекс массы тела (ИМТ) 24, женщина, 44 года. Анамнез: первые сутки – боль в горле, заложенность носа, температура 37,9 °С градусов, вторые и третьи сутки – субфебрильная температура, слабость, головокружение. Восьмые сутки – заложенность носа, головные боли в лобной области, слабость, головокружение.

Проведение теста ДНК-комет осуществляли по методу https://cyberleninka.ru/article с модификацией. Вместо SYBR Green I применяли окрашивание DAPI (5 мкг/мл PBS; Sigma) в течение 15 секунд, промывали фосфатным буфером. Окрашенные препараты оценивали с использованием флуоресцентного микроскопа ZEISS Axio Imager.А2 с системой документирования изображений, включающей цветную цифровую камеру Camera Axiocam 506 color, а также с использованием программного обеспечения CometScore.

Обнаружено, что интервал изменения «момента хвоста» был больше интервала изменения «момента головы», что соотносится с литературными данными. Средние различия как по «моменту хвоста», так и по «моменту головы» были значительно выше в группе с COVID-19. Для оценки уровня повреждений ДНК использовали параметр %Tail DNA – процент ДНК в хвосте «кометы», который составил 20,166 ± 12,59, что значительно выше литературных данных по здоровому населению.

Заключение. Несмотря на отсутствие клинического проявления постковидного синдрома было обнаружено увеличение % ДНК в хвосте кометы. Фрагментация ДНК может быть основным патологическим механизмом постковидных состояний. Полагают, что фрагментация ДНК возникает вследствие развития оксидативного стресса и атаки молекулы ДНК активными формами кислорода. Параметр %Tail DNA (%TDNA) является одним из надежных показателей оценки степени повреждения ДНК. На основе полученных данных разработаны критерии исключения пациентов, перенесших COVID-19 в запланированные исследования.

Оценка распространенности энтеровирусов, выделенных от детей мигрантов и детей, проживающих на Северо-Западе России (Антоненков К.А.)

ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Роспотребнадзора, г. Санкт-Петербург

Antonenkov K. A.

EVALUATION OF THE INCIDENCE OF ENTEROVIRUS ISOLATED FROM CHILDREN OF MIGRANTS AND CHILDREN LIVING IN THE NORTH-WEST OF RUSSIA

С 2006 года в Российской Федерации реализуется программа по эпидемиологическому надзору за энтеровирусной инфекцией (ЭВИ), которая является составляющей частью Программы глобальной ликвидации полиомиелита. ЭВИ носит спорадический характер и примерно в 85% случаев инфицирования не имеет выраженной клинической картины. Вместе с этим энтеровирусы (ЭВ) способны провоцировать развитие тяжелой формы заболевания – энтеровирусного менингита, что требует госпитализации.

Цель: молекулярно-генетическое исследование штаммов неполиомиелитных энтеровирусов (НПЭВ) выделенных от детей из семей мигрантов и детей-резидентов Северо-Запада России.

Выделение НПЭВ проводили на культурах клеток RD и Hep-2 в соответствии с Руководством по лабораторным исследованиям полиомиелита ВОЗ. Экстракцию нуклеиновых кислот осуществляли тест-системой «Ампли-Прайм Рибо-Преп» (ФБУН ЦНИИЭ). Типирование ЭВ проводили секвенированием вариабельного участка генома – VP1.

Санкт-Петербургский региональный центр (СПб РЦ) курирует 14 территорий, включая 11 территорий Северо-Западного округа. В период с 2021 по 2023 г. в РЦ были типированы ЭВ, выделенные из 92 проб фекалий. Результаты типирования показали, что у детей мигрантов, прибывших из неблагополучных по полиомиелиту территорий (Дагестан, Таджикистан, Чеченская Республика, Украина) в структуре заболеваемости преобладают Coxsackievirus (Cox) вида В: Cox B4 (8,2%) Cox B5 (14,1%). Также часто выделяются ECHO-вирусы: ECHO 13 (9,4%), ECHO 11 (7%), ECHO 14 (7%), ECHO 6 (10,5%). В то время как у детей, постоянно проживающих на территории Северо-Западного округа, превалируют энтеровирусы вида А: Cox A6 (9%), Cox A2 (2%) и Cox A4 (18%). Стоит отметить, что один ребенок, инфицированный вирусом Cox А2, погиб вследствие острого серозного менингита.

Заключение. Спектр циркулируемых ЭВ у детей мигрантов значительно отличается от такового у детей резидентов. Молекулярный анализ позволяет определить генотип ЭВ, что дает возможность определения эндемичности выделенного вируса и заподозрить занос. Необходим эпидемиологический надзор за энтеровирусной инфекцией для предотвращения вспышек заболеваемости.

Содержание холестерина, липопротеинов низкой плотности и аполипопротеина E в крови больных с острой ишемией нижних конечностей (Арискина О.Б., Пивоварова Л.П., Осипова И.В., Магамедов И.Д., Поцхор-оглы С.Л., Количенко Л.В., Гаджигаева М.Г., Поповская С.Д.)

ГБУ НИИ скорой помощи им. И. И. Джанелидзе, г. Санкт-Петербург

Ariskina O. B., Pivovarova L. P., Osipova I. V., Magamedov I. D., Potskhor-ogly S.L., Kolichenko L. V., Gadzhigaeva M. G., Popovskaya S. D.

CONTENT OF CHOLESTEROL, LOW DENSITY LIPOPROTEINS AND APOLIPOPROTEIN E IN THE BLOOD OF PATIENTS WITH ACUTE ISCHEMIA OF THE LOWER LIMB

Одним из биомаркеров метаболизма липидов является аполипопротеин E (АроЕ). Основной функцией ApoE является транспорт липидов между различными клетками и органами. В крови ApoE определяет поглощение остатков хиломикронов и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) печенью.

Цель: изучить содержание АроЕ, липопротеинов низкой плотности и холестерина у пациентов с острой ишемией нижних конечностей.

Пациенты и методы. Были обследованы 71 пациент с острой ишемией нижних конечностей (ОИНК), возраст 70 (64; 83) лет. Объем оперативного вмешательства заключался в выполнении тромбэктомии, по показаниям выполняли ампутацию конечности. В послеоперационном периоде все больные получали антиагрегантную и антикоагулянтую терапию. Группу сравнения составили волонтеры той же возрастной категории – 70 (55; 80) лет. У больных с ОИНК при поступлении на лечение: до операции, после операции, на 3, 5, 7, 10 сутки наблюдения исследовали содержание в крови холестерина и ЛПНП; Cobas 6000 C501) и АроЕ методом ИФА. Для статистической оценки использовали пакет прикладных программ Statistica 6.0, использовали медиану и межквартильный размах, применяли t-критерий Стьюдента и корреляционный анализ Спирмена. Критический уровень значимости p < 0,05.

До оперативного вмешательства уровень холестерина крови пациентов был значительно ниже нормы (до 2,5 ммоль/л) и составлял 40% от уровня у волонтеров, содержание ЛПНП развивалось по подобному сценарию. После операции наблюдалось некоторое повышение уровня АроЕ, а в периоде ишемии-реперфузии происходило дальнейшее снижение его содержания, по преодолении этого периода на 7–10 сутки содержание АроЕ резко возрастало.

АпоЕ – один из ключевых аполипопротеинов, регулирующих уровень липидов в плазме крови, относится к группе «динамических» апобелков, активно перемещающихся между липопротеинами разной плотности в процессе их циркуляции в кровеносном русле. В процессе ишемии и гипоксии резко меняется энергетический метаболизм: из-за недоокисления субстрата снижается выработка АТФ и ткани испытывают энергодефицит. Для сохранения жизнеспособности тканей окислительный метаболизм перестраивается на экономичный вариант. Усиливается транспорт жирных кислот и липидов, являющихся субстратом для синтеза ацетил-КоА из циркуляции в клетку – в митохондрии, таким образом содержание их в плазме в остром периоде резко снижается. При преодолении препятствия кровообращению и ишемии и сопутствующего ей воспаления уровень холестерина и ЛПНП постепенно нормализуются и возвращаются к референтным значениям. АроЕ как ответственный за их транспорт апобелок восстанавливается раньше – на 5–7 сутки и затем превышает нормальный уровень, тем самым создавая предпосылки для нормализации липидного обмена.

До операции АроЕ коррелирует со спонтанной хемилюминесценцией (r = 0,412; p < 0,05); после операции – с креатинином (r = 0,790; p < 0,001); на 3 сутки – с общей антиоксидантной активностью (r = 0,858; p < 0,05); на 7 сутки – с маркером воспаления СРБ (r = 0,957; p < 0,01); на 10 сутки – с лейкоцитарным индексом интоксикации (r = –0,921; p < 0,01).

Выводы. В остром периоде ишемии нижних конечностей возникают условия для вторичной транзиторной гиполипидемии. В результате хирургического и терапевтического лечения преодолевается ОИНК, сопровождаемая воспалением, повышается содержание АроЕ, что создает условия для нормализации липидного обмена.

Интерпретация результатов выявления иммуноглобулинов разных классов против инфекционных агентов в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа (Ахапкина И.Г.)

ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова», г. Москва

Akhapkina I. G.

INTERPRETATION OF THE RESULTS OF DETECTION OF DIFFERENT CLASSES IMMUNOGLOBULINS AGAINST INFECTIOUS AGENTS IN BLOOD SERUM BY ELISA

Цель: рассмотреть вопрос интерпретации результатов выявления в сыворотках крови пациентов антител разных классов против разных инфекций при постановке дифференциального диагноза в случаях отсутствия специфических клинических симптомов. Инфицирование человека многими инфекциями сопровождается общими клиническими симптомами воспалительного процесса. В таких случаях и локализация воспалительного процесса в тех или иных органах, тканях, системах чаще не указывает на определенный инфекционный агент. Это характерно для ряда инфекций, например, семейства Mycoplasmataceae и Chlamydiaceae, Candida spp., Toxoplasma gondii. Названные инфекции не выделяются собственными клинико-морфологическими признаками, что осложняет диагностику возбудителя на ранних этапах заболевания. Причем в зависимости от активности иммунного ответа макроорганизма, а именно величины соотношения Th1/Th2-иммунных ответов, заболевание может протекать в острой форме или перейти в хроническую форму, либо скрытое носительство. Последним двум формам соответствует снижение Th1-иммунного ответа и повышение противовоспалительного Th2-иммунного ответа, что в свою очередь приводит, в частности, к провоцированию реакций гиперчувствительности. Классический вариант синтеза IgM и IgG антител в ответ на проникновение в макроорганизм какого-либо антигена соответствует следующей схеме: в первые 5 суток образуются и достигают максимальной концентрации, в основном, IgM антитела; в следующие 5 суток отмечается снижение синтеза IgM антител, появление и увеличение концентрации IgG антител; к 28 суткам концентрация IgG антител достигает максимума и остается постоянной некоторое время, которое зависит от течения заболевания. Методом ИФА в лабораторной практике обычно проводят определение специфических IgM и IgG антител. На практике чаще выявляют наличие только IgG антител. Это обусловлено тем, что клинические симптомы обычно бывают невыраженными, поэтому исследование проводят уже в период доминирования синтеза антител класса G. Диагностический уровень IgG антител указывает на вялотекущий процесс, хроническую форму заболевания либо остаточный иммунитет, после полной элиминации инфекции из организма человека. Важным элементом лабораторного исследования для диагностических целей является проведение анализа методом парных сывороток. Иными словами, анализ на выявление специфических антител следует проводить повторно через две недели. В случае получения совпадающих результатов уровня IgG, можно говорить о хронической форме заболевания. Для подтверждения полной элиминации инфекционного агента (контроль лечебного процесса) необходимо провести определение специфических IgG антител через 2–3–4 месяца, в случаях ранее установленного факта отсутствия стойкого иммунитета, например, при оппортунистических инфекциях. Это подтверждается ранее проведенными контролем выявления специфических IgG антител после прохождения курса антибиотикотерапии и работами по разработке вакцинного препарата против микоплазм, который оказался неэффективным. Длительное выявление специфических IgG антител в сыворотке крови пациента, в отдельных случаях, указывает на неэффективность выбранного антибиотика, недостаточного времени лечения. Однако в тех случаях, когда инфекционных агент способен вызывать стойкий иммунитет, например, некоторые вирусные инфекции или вакцинные препараты, длительное выявление специфических IgG антител указывает на эффективную защиту организма человека в течение определенного времени.

Заключение. Корректная интерпретация результатов выявления в сыворотке крови пациента разных классов специфических антител и временные периоды их обнаружения зависят от природы инфекционного агента, его способности активировать различные элементы защитных реакций макроорганизма.

Результаты межлабораторных сравнительных испытаний выявления волчаночного антикоагулянта в МСИ «ФСВОК-2023». Основные ошибки участников (Бабкеева Э.Р.)

АСНП «Центр внешнего контроля качества клинических лабораторных исследований», г. Москва

Babkeeva E. R.

RESULTS OF INTERLABORATORY COMPARISONS OF LUPUS ANTICOAGULANT TESTING IN 2023 AND MOST COMMON ERRORS OF PARTICIPANTS

Межлабораторные сравнительные испытания, выполняемые в целях внешней оценки качества лабораторных исследований, позволяют на основе результатов исследований клинико-диагностическими лабораториями (КДЛ) контрольных образцов оценивать качество выполняемых ими исследований и достоверность полученных результатов. Согласно Приказу МЗ РФ от 18.05.2021 № 464н п. 11 участие клинико-диагностических лабораторий (КДЛ) в программах МСИ является обязательным.

Цель: анализ результатов исследований, проведенных участниками Программы МСИ «ФСВОК» «Волчаночный антикоагулянт» в 2023 г., проанализировать неудовлетворительные результаты и выявить основные ошибки.

АСНП «ЦВКК» были разработаны технические требования к образцам для проверки качества исследований (ОПК) для проведения программы МСИ «ФСВОК» «Волчаночный антикоагулянт» по выявлению волчаночного антикоагулянта в плазме крови человека. ОПК представляли собой лиофилизированные плазмы человека объемом после восстановления 1 мл. Участникам были направлены 12 ОПК для проведения 3 циклов оценки качества (по 4 ОПК двух уровней концентраций в одном цикле). Участниками программы МСИ были использованы реагенты как производства РФ, так и зарубежных производителей. Правильность результатов измерений, полученных лабораториями, оценивалась путем сличения полученных участниками результатов с приписанными значениями, установленными производителем ОПК. Оценка проводилась с применением аналитической системы, разработанной по техническому заданию АСНП «ЦВКК». Анализ долей неудовлетворительных результатов и распределения основных ошибок проводился с использованием программы Microsoft^® Excel^®.

В 2023 г. в программе МСИ «Волчаночный антикоагулянт» приняла участие 51 лаборатория Российской Федерации и стран СНГ. Доля результатов, не соответствующих критериям качества МСИ «ФСВОК», составила 22%. Доли неудовлетворительных результатов выявления волчаночного антикоагулянта в положительных, слабоположительных и отрицательных ОПК составили 16%, 48% и 13%, соответственно. Среди основных ошибок, допущенных участниками при анализе ОПК, выявлены:

– аналитические ошибки, предположительно связанные с нарушением алгоритма исследования, неправильное измерение значений времени свертывания нормальной и контрольной плазмы, неверные расчеты нормализованного отношения – 65%;

– ошибки интерпретации результатов исследования – 11%;

– преаналитические ошибки (ошибки идентификации ОПК) – 7%;

– постаналитические ошибки, связанные с неверным заполнением формы для результатов (отсутствие указания заключения для ОПК, что являлось обязательным условием для оценки результатов участника) – 16%.

Среди лабораторий, допустивших аналитические ошибки, подавляющее большинство (94%) нарушило алгоритм проведения исследования на волчаночный антикоагулянт. Согласно рекомендациям Международного общества тромбоза и гемостаза исследование на наличие/отсутствие волчаночного антикоагулянта в образце следует проводить минимум 2 разными методами. В большинстве случаев лаборатории выполняли повторное исследование тем же методом, что и первичное, или же не выполняли его вовсе.

Заключение. В 2023 году наибольшее количество неудовлетворительных результатов было получено участниками МСИ «ФСВОК» при определении волчаночного антикоагулянта в слабоположительных образцах. Основным источником ошибок участников стало неверное следование алгоритму проведения исследования.

Клиническая значимость оценки воспалительных маркеров активации сосудистого эндотелия в слезной жидкости и сыворотке крови пациентов с возрастной макулярной дегенерацией (Балацкая Н.В., Куликова И.Г., Еремеева Е.А., Андрюшин А.Е.)

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца» Минздрава России, г. Москва

Balatskaya N. V., Kulikova I. G., Eremeeva E. A., Andryushin A. E.

CLINICAL SIGNIFICANCE OF EVALUATION OF INFLAMMATORY MARKERS OF VASCULAR ENDOTHELIAL ACTIVATION IN TEAR FLUID AND BLOOD SERUM OF PATIENTS WITH AGE-RELATED MACULAR DEGENERATION

Актуальность. Среди важных факторов риска развития возрастной макулярной дегенерации (ВМД) – одной из главных причин слабовидения и слепоты у пациентов пожилого возраста, особое место отводят нарушениям гемодинамики, обусловленным эндотелиальной дисфункцией. Изучение воспалительных маркеров активации эндотелия представляется актуальным для понимания механизмов развития ВМД, подходов к разработке патогенетически ориентированной терапии на ранних стадиях заболевания, вторичной профилактики осложнений.

Цель: сравнительный анализ уровней растворимых молекул адгезии sE-selectin, sP-selectin, sICAM-1, sVCAM-1 и хемокина МСР-1/CCL2 в слезной жидкости (СЖ) и сыворотке крови (СК) пациентов с начальной и промежуточной стадиями ВМД.

Иммунологические исследования выполнены в тест-пробах 58 больных, распределенных, согласно клинической классификации AREDS, на три группы: 26 человек с ранней ВМД (I группа – AREDS2), 14 пациентов с промежуточной стадией заболевания (II группа – AREDS3) и 18 здоровых доноров пожилого возраста (контроль = группа риска – AREDS1). Обработано 116 образцов СК и СЖ. В исследовании применен метод проточной цитометрии (лазерный проточный цитофлуориметр BD FACS Canto II, США) с использованием мультиплексной панели, собранной из совместимых симплексных тест-систем Flow Cytomix^TM (Bender MedSystem GmbH, Германия) для определения sICAM-1, sVCAM-1, sE-selectin, sP-selectin и МСР-1/CCL2, позволяющей осуществлять их одновременное определение в пробе. Обработка данных осуществлялась в пакете FlowCytomix Pro v 6.0 (BenderMed Systems GmbH, Германия). Оценку результатов выполняли с учетом пределов чувствительности для каждого аналита. Статистический анализ выполняли с использованием Statistica 12.0 (Stat Soft Inc., USA).

В СЖ пациентов с ВМД обнаружено увеличение содержания селектинов по сравнению с группой риска: в СЖ группы AREDS2 концентрация sE-selectin составила 34,4 нг/мл: величина этого параметра практически в 4 раза превосходила таковую в норме (р < 0,05). В ходе анализа локальной продукции sP-selectin при начальной ВМД обнаружена тенденция к повышению уровня этого селектина практически в 2 раза (до 28,9 нг/мл против контроля – 14,1 нг/мл). Более выраженные сдвиги, со значимым ростом содержания sP-selectin в СЖ, отмечались и в группе AREDS3 (р < 0,05). Достоверной разницы в локальной продукции селектинов между группами с ВМД не обнаружено; однако диапазоны их концентраций (от минимума к максимуму) отличались: в СЖ пациентов с начальной ВМД разброс определенных в данной группе показателей sE- и sP-selectin был намного шире. При анализе содержания селектинов в СК не выявлено достоверных сдвигов относительно таковых у здоровых доноров. Повышение локального уровня MCP-1/CCL2 в группе AREDS2 до 491 пг/мл скорее всего явилось результатом вклада множества клеток: в пользу этого свидетельствовал широкий размах значений показателя; содержание этого цитокина в СК пациентов обеих клинических групп находилось в пределах возрастной нормы. В ходе работы обнаружена тенденция к усилению локальной продукции sICAM-1 (в СЖ) на стадии AREDS2 относительно контроля и значительное увеличение концентрации изучаемого белка в СЖ пациентов с промежуточной ВМД, в 3 раза превышающей таковую в группе риска (р < 0,05). Анализ не выявил статистически значимых различий в локальных концентрациях sICAM-1 в основных группах, но пределы диапазонов изменений данного показателя (от минимума к максимуму) отличались: в СЖ пациентов с начальной ВМД размах значений sICAM-1 был намного шире. Тенденция к повышению концентрации sVCAM-1 в СК пациентов группы AREDS3 позволяет думать о подключении системных механизмов активации эндотелия на продвинутых стадиях заболевания. Для определения возможной диагностической ценности определения в СЖ sE-, sP-selectin, МСР-1/CCL2 и sICAM-1 был проведен ROC-анализ, на основании которого были выделены потенциальные локальные биомаркеры сосудистой активации при ранней ВМД: AUC для sE-selectin составила 0,817 (p = 0,001), для MCP-1 / CCL2 – 0,813 (p = 0,009), для sICAM-1 – 1,0 (p < 0,001).

Заключение. в патогенезе ВМД участвуют sICAM-1, sVCAM-1, sE-selectin, sP-selectin, МСР-1/ CCL2; повышение концентраций этих белков в СЖ указывает на компроментацию гемато-ретинального барьера и необходимость дополнительного включения препаратов вазопротекторного, противовоспалительного действия в основной курс терапии заболевания.

Пресепсин у больных с новой коронавирусной инфекцией COVID-19 (Баранов А.А., Носков С.М., Решетникова Е.Ю., Речкина О.П., Золотавкина С.С., Лапкина Н.А.)

ФГБОУ ВО «Ярославский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Ярославль

Baranov A. A., Noskov S.M., Reshetnikova E. Y., Rechkina O. P., Zolotavkina S. S., Lapkina N. S.

PRESEPSIN IN PATIENTS WITH NOVEL COVID-19 CORONAVIRUS INFECTION

Цель: оценить диагностическое значение пресепсина при инфекции COVID-19.

В исследование были включены пациенты с новой коронавирусной инфекцией COVID-19, поступившие в мае – июне 2020 года в стационар ГБУЗ ЯО «Клиническая больница № 3» (главный врач В. А. Баунов), являющейся клинической базой кафедры госпитальной терапии с профпатологией (заведующий кафедрой профессор С. М. Носков) ФГБОУ ВО ЯГМУ Минздрава России. Обследовано 45 пациентов (25 женщин и 20 мужчин) в возрасте от 39 до 83 лет (средний возраст 60,7 года). Всем больным был выставлен диагноз: U07.1 Основное заболевание: Новая коронавирусная инфекция COVID-19 (подтвержденная), среднетяжелая форма, внебольничная двусторонняя пневмония, ДН 1–2.

Уровень пресепсина в плазме крови определяли, используя тест-системы на основе хемилюминесцентного иммуноферментного анализа с помощью автоматического иммуноанализатора (PATHFAST; Mitsubishi Chemical Analytec Co. Ltd., Токио, Япония).

Концентрация пресепсина и маркеров воспаления у больных представлена в таблице 1.

Таблица 1

Концентрация пресепсина и маркеров воспаления у больных (n = 45)

Концентрация пресепсина у больных составила 776,00 [6,40; 45,30] пг/мл, что значительно превышало верхнюю границу нормы (200 пг/мл). При этом уровень прокальцитонина регистрировался в пределах референсных значений. Концентрация пресепсина не коррелировала с возрастом больных (r=0,18, p>0,05). Не обнаружено корреляционных связей между концентрацией пресепсина и уровнем других показателей, отражающих системное воспаление, включая интерлейкин 6, СРБ, ферритин (таблица 2). При этом обнаружены достоверные положительные связи между прокальцитонином и ИЛ-6, а также D-димером. Значения ИЛ-6 также положительно достоверно коррелировали с концентрацией D-димера.

Таблица 2

Корреляция между уровнем пресепсина и концентрацией маркеров воспаления

У троих больных (2 женщин и 1 мужчина) заболевание закончилось летальным исходом. У всех пациентов отмечалось значительное повышение концентрации пресепсина – 1193 пг/мл, 2982 пг/мл и 838 пг/мл соответственно, в сочетании с другими маркерами воспаления.

Заключение. У больных новой коронавирусной инфекцией COVID-19 отмечается значительное повышение концентрации пресепсина, не связанное с другими лабораторными показателями воспаления, которое в отдельных случаях имеет неблагоприятное прогностическое значение.

Антитела к кардиолипину при хроническом нейроборрелиозе (Баранова Н.С., Овсянникова Л.А., Спирин Н.Н., Остапенко Я.С., Баранов А.А.)

ФГБОУ ВО «Ярославский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Ярославль

Baranova N. S., Ovsyannikova L. A., Spirin N. N., Ostapenko Y. S., Baranov A. A.

ANTIBODIES TO CARDIOLIPIN IN CHRONIC NEUROBORRELIOSIS

Лайм-боррелиоз (ЛБ) – инфекционное полиорганное природноочаговое трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является спирохета комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, а переносчиком – иксодовые клещи.

Цель: оценить роль антител к кардиолипину в патогенезе хронического нейроборрелиоза.

Антитела к кардиолипину (аКЛ) изотипов IgG и IgM были определены у 43 пациентов с хроническим нейроборрелиозом с помощью твердофазного иммуноферментного метода с использованием коммерческих тест-систем реактивов фирмы ORGenTec Diagnostica GmbH (Германия). Для стандартизации использовали негативные и позитивные сыворотки. Результаты выражали в международных единицах концентрации MPL и GPL. В качестве верхней границы нормы был принят уровень 25 GPL, 16 MPL, что соответствует M + 5σ от значений доноров (7,9 ± 3,3 GPL и 4,18 ± 2,3 MPL). Значения аКЛ в пределах 26–40 GPL или 17–40 MPL считались низко, более 40 GPL и 40 MPL – умеренно и высокоположительными согласно международным рекомендациям.

Значения IgM аКЛ у больных варьировали от 1,30 до 69,70 MPL, в среднем составляя 22,50 [6,40; 45,30] MPL. У 12 (27,9%) больных уровень IgM аКЛ превышал 40 MPL, принятых в качестве критерия позитивности умеренного и высокого титра данных аутоантител, характерного для антифосфолипидного синдрома. При клиническом, лабораторном и инструментальном обследовании больных с высокими значениями IgM аКЛ не выявлено критериев антифосфолипидного синдрома. Значения IgG аКЛ у больных ЛБ варьировали от 0,10 до 34,50 GPL, в среднем составляя 14,20 [9,50; 27,40] GPL. Ни в одном случае уровень IgG аКЛ не превышал 40 GPL. Нами не отмечено значимых ассоциаций между высокими значениями IgM и IgG аКЛ и особенностями клинической картины ЛБ. У 28 больных ЛБ проведено исследование динамики уровня IgM аКЛ и IgG аКЛ (до и после курса антибактериальной терапии). Медиана и интерквартильный размах IgM аКЛ у больных до лечения составили 23,60 [8,12; 46,3] MPL, а после терапии – 10,05 [5,10; 22,40] MPL, что было достоверно ниже (p<0,01). После терапии отмечалось значимое снижение количества больных ЛБ, имеющих уровень IgM аКЛ более 40 MPL: с 9 человек (32,1%), до 3 (10,7%) (p < 0,05).

Заключение. Учитывая, что процессы активации и/или апоптоза сосудистого эндотелия играют одну из ведущих ролей в развитии нейроборрелиоза, обнаруженный нами феномен увеличения частоты встречаемости IgM аКЛ и снижения их концентрации на фоне антибактериальной терапии, вероятно, является отражением фазы инфекции как основного патогенетического механизма нейроборрелиоза.

Дисбаланс показателей липидного обмена при ожирении (Басалай А.А., Митюкова Т.А., Полулях О.Е., Кохан С.Б., Костюченко Н.С., Кузьменко И.В., Лемешко Е.В.)

ГНУ «Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси», г. Минск, Республика Беларусь

Basalai A. A., Mityukova T. A., Poluliakh O. Y., Kokhan S. B., Kastiuchenka M. S., Kuzmenka I. V., Lemeshko Y. V.

IMBALANCE OF LIPID METABOLISM IN OBESITY

Цель: провести оценку показателей липидного обмена у лиц с разной массой тела и выявить наиболее значимые критерии, характеризующие степень ожирения.

Обследовано 35 человек – 11 мужчин и 24 женщины (средний возраст 48,3 ± 4,4 и 47,2 ± 2,0 лет, соответственно), проходивших курс лечебно-оздоровительных мероприятий на базе санатория «Ислочь» Национальной академии наук Беларуси. Обследованные разделены на группы в зависимости от индекса массы тела (ИМТ): 18–25 кг/м² (норма), 25–30 кг/м² (избыточная масса тела) и > 30 кг/м² (ожирение). Проведено определение общего холестерина (ОХ), триглицеридов (ТГ), холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и высокой плотности (ЛПВП) в сыворотке крови на автоматическом биохимическом анализаторе BS-200 (Mindray, Китай) с использованием коммерческих наборов «Диасенс» (Республика Беларусь). Данные обработаны с помощью программы Statistica 12.0.

Уровень ЛПВП поступательно снижается при нарастании массы тела и выходит за пределы нормы с увеличением ИМТ > 25 кг/м². В группах с ИМТ 25–30 кг/м² и > 30 кг/м² концентрация ЛПВП была статистически значимо снижена на 21,6% и 32,2% (р = 0,035, p = 0,015 соответственно) относительно группы ИМТ 18–25 кг/м². Выявлена достоверная отрицательная корреляционная зависимость между ИМТ и ЛПВП (r = –0,38, p = 0,026). Снижение уровня ЛПВП в сыворотке крови обуславливало нарастание коэффициента атерогенности (КТ) в группах с ИМТ 25–30 и > 30 кг/м². Значения КА в вышеназванных группах выходили за пределы нормы, что свидетельствует о повышенном риске развития сердечно-сосудистых заболеваний у лиц с избыточной массой тела и ожирением. Соотношение ТГ/ЛПВП было повышенным при избыточной массе тела и ожирении в 2,1 и 3,0 раза (р = 0,047, p = 0,007) относительно нормы. Концентрация ЛПНП в сыворотке крови у исследуемых лиц не претерпевала значимых изменений в зависимости от ИМТ.

Заключение. Снижение ЛПВП, нарастание соотношения ТГ/ЛПВП, наряду с повышением КА, являются информативными показателями для оценки риска развития сердечно-сосудистых заболеваний у лиц с повышенной массой тела и ожирением.

Сравнительный анализ маркеров воспаления у детей с краниосиностозами в периоперационном периоде (Баширян Б.А., Гаджиева О.А., Сатанин Л.А., Лавренюк Е.А., Кокаева И.К.)

ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии им. акад. Н. Н. Бурденко» МЗ РФ, г. Москва

Bashiryan B. A., Gadzhieva O. A., Satanin L. A., Lavrenyuk E. A., Kokaeva I. K.

COMPARATIVE ANALYSIS OF INFLAMMATION MARKERS IN CHILDREN WITH CRANIOSYNOSTOSIS IN THE PERIOPERATIVE PERIOD

Краниосиностозы (КС) – пороки развития костей свода и основания черепа, проявляющиеся ранним сращением черепных швов. Лечение краниосиностозов предполагает хирургическое вмешательство, включающее трепанацию и реконструкцию костей. Клинической предпосылкой к проведению исследования послужили клинические наблюдения КС с развитием необъяснимой лихорадки в раннем послеоперационном периоде и повышением уровня маркеров воспаления (СРБ, ПКТ). В ряде наблюдений показатели этих маркеров достигали уровня «септических». Зачастую врачи оказывались в сложном положении выбора между динамическим наблюдением и назначением эмпирической антибактериальной терапии.

Цель: проспективная оценка клинических и лабораторных показателей воспаления у детей с краниосиностозами после высокотравматичных операций.

В исследование были включены дети в возрасте до 24 месяцев с КС, которым была проведена реконструктивная операция, при условии выполнения протокола лабораторной диагностики, включающего общий анализ крови, биохимический анализ крови с исследованием С-реактивного белка (СРБ), прокальцитонина (ПКТ), ферритина (ФТ) и пресепсина (ПСП). В итоге было включено 32 пациента (24 мальчика и 8 девочек) в возрасте 10,29 ± 4,99 месяцев, прооперированных в ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии им. акад. Н. Н. Бурденко» МЗ РФ.

Фебрильная лихорадка (>38 °C) отмечалась в 5 случаях. Наблюдались пики температурной кривой на 2-е и 5-е сутки после операции. На 1-е сутки после операции отмечалось достоверное повышение уровня лейкоцитов, который начинал снижаться к 3-м суткам и достигал дооперационных значений к 5-м суткам после операции. В то же время повышение уровня СОЭ достоверно было отмечено к 3-м суткам и оставалось повышенным к 5-м суткам. Во всех наблюдениях отмечалось резкое достоверное повышение уровня СРБ на 1-е сутки после операции, который продолжал повышаться к 5-м суткам, и ни у одного из пациентов не достиг порогового значения нормы (5,0 мг/л). Уровень ПКТ также резко увеличивался на 1-е сутки после операции, в некоторых случаях превысив «септические» цифры (2 нг/мл), и также быстро и достоверно снижался до нормальных значений к 5-м суткам. Динамика изменения ФТ была аналогичной СРБ – отмечалось достоверное увеличение его уровня с 1-х по 5-е сутки после операции. В отличие от предшествующих биохимических маркеров воспаления показатели ПСП оставались в пределах нормальных значений, что полностью соответствовало клинической картине – отсутствию инфекционных осложнений. Таким образом, из использованных в исследовании биохимических маркеров воспаления наибольшую специфичность продемонстрировал ПСП, что делает его более значимым в лабораторной диагностике инфекционных осложнений.

Заключение. После реконструктивных операций при КС у детей в раннем послеоперационном периоде наблюдается увеличение уровня биохимических маркеров воспаления (СРБ, ПКТ, ФТ), что не является признаком инфекционного осложнения, а отражает неспецифическую системную реакцию организма. Высокая травматичность реконструктивных операций при хирургии КС подтверждается выраженностью синдрома системного воспалительного обмена, проявляющегося повышением белков острой фазы воспаления. ПСП оказался более специфичным из всех использованных в исследовании биохимических маркеров воспаления, что делает его особенно важным для лабораторной диагностики инфекционных осложнений.

Изменение гормональных и биохимических маркеров хирургического стресс-ответа у детей после реконструктивных операций при краниосиностозах (Баширян Б.А., Гаджиева О.А., Сатанин Л.А., Кокаева И.К., Лавренюк Е.А.)

ФГАУ «НМИЦ нейрохирургии им. акад. Н. Н. Бурденко» МЗ РФ, г. Москва

Bashiryan B. A., Gadzhieva O. A., Satanin L. A., Kokaeva I. K., Lavrenyuk E. A.

CHANGES IN HORMONAL AND BIOCHEMICAL MARKERS OF THE SURGICAL STRESS RESPONSE IN CHILDREN AFTER RECONSTRUCTIVE SURGERY FOR CRANIOSYNOSTOSES

Аномалии развития костей свода и основания черепа, характеризующиеся преждевременным сращением швов черепа, называют краниосиностозами (КС). С шестимесячного возраста методом коррекции данных пороков являются реконструктивные операции, характеризующиеся высокой травматичностью, высоким риском периоперационных осложнений и сравнительно тяжелым течением послеоперацинного периода. После высокотравматичных хирургических вмешательств в послеоперационном периоде происходит изменение клинических и лабораторных показателей, которые являются отражением хирургического стресс-ответа (ХСО). ХСО – это совокупность патофизиологических процессов в организме, вызванных метаболическими, эндокринными и воспалительными (иммунными) реакциями, индуцированными операционной травмой.

Цель: изучение изменений гормональных и биохимических маркеров ХСО у детей, перенесших реконструктивные операции при КС.

В проспективное исследование были включены 32 пациента с КС (24 мальчика и 8 девочек) в возрасте 10,3 ± 5,0 месяцев, которые перенесли реконструктивные операции на базе ФГАУ НМИЦ нейрохирургии им. акад. Н. Н. Бурденко МЗ РФ. В ходе исследования были изучены ряд метаболических и гормональных маркерев ХСО. Лабораторные исследования проводились накануне операции, а также на 1-е, 3-и и 5-е сутки после операции.

В первые сутки после операции уровень сывороточного железа снижался практически в два раза и оставался стабильно низким за все время наблюдения. Значение ферритина неуклонно увеличивалось, достигая максимума на 5-е сутки после операции. При этом уровень трансферрина значительно не изменялся. На фоне использования дексаметазона уровень АКТГ имел тенденцию к снижению в течение первых 3 суток после операции с последующим повышением на 5-е сутки. Несмотря на это, отмечался достоверный прирост уровня кортизола на 1-е сутки после операции, с выраженным падением на 3 сутки в два раза от нижней границы нормы и последующим восстановлением (на 5-е сутки) до нормальных значений. Значения инсулина резко возрастали (в пять раз) на 1-е сутки после операции и превышали верхнюю границу нормы вплоть до последнего исследования. На этом фоне отмечался рост показателей глюкозы крови на 1-е сутки с постепенным снижением к последнему исследованию. HOMA-IR резко увеличивался к 1-м суткам и далее имел тенденцию к постепенному снижению, при этом не достигая пороговых значений нормы к 5-м суткам. На 1-е сутки после операции отмечалось достоверное снижение уровня ТТГ, с постепенным восстановлением значений на дооперационный уровень. Следствием этого было снижение уровня свТ 3 и свТ 4 с быстрым восстановлением на 5-е сутки после операции. В 2 наблюдениях отмечалось снижение свТ 3 ниже границы нормы, что расценено как синдром эутиреоидной патологии. Динамика уровня пролактина заключалась в его повышении на 1-е сутки после операции, с последующим снижением, но в пределах референсных значений. У пациентов в группе с лихорадкой и без нее в послеоперационном периоде, и в группе с гемотрансфузией и без, сравнение изучаемых лабораторных параметров не выявило значимых достоверных отличий.

Заключение. В раннем послеоперационном периоде выявлены проявления гипоферремии, инсулинорезистентности, гипергликемии, и транзиторного синдрома эутиреоидной патологии. Вследствие применения дексаметазона в интра- и послеоперационном периодах не было выявлено характерных изменений АКТГ и кортизола. Ранний послеоперационный период у детей с краниосиностозами после реконструктивных операций сопровождается статистически достоверными изменениями уровня гормонов стресс-ответа, а также рядом метаболических изменений, что в свою очередь обуславливает тяжесть течения послеоперационного периода и определяет риски развития нежелательных явлений и осложнений. Это диктует необходимость проведения медикаментозной модуляции стресс-ответа и снижения операционной травмы путем активного внедрения малоинвазивных операций в клиническую практику.

Новая методология скрининга для выявления наркозависимых лиц (Бекман Н.И., Помелова В.Г., Осин Н.С.)

Бекман Н. И.², Помелова В. Г.^{1, 2}, Осин Н. С.^{1, 2}

¹ ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения» ФМБА России, г. Москва

² ООО «ИММУНОСКРИН», г. Москва

Bekman N. I., Pomelova V. G., Osin N. S.

NEW METHODOLOGY OF SCREENING FOR THE DETECTION OF DRUG-DEPENDENT PERSONS

Выявление наркозависимых лиц в социально значимых группах риска ограничено высокой стоимостью тестирования, связанной с отбором и хранением жидких образцов.

Цель: представить иммунодиагностическую платформу, основанную на мультиплексном иммунофосфоресцентном анализе (ФОСФАН^ТМ).

Спектр наркотических средств выявляется в пулированных клинических образцах сухих пятен мочи, высушенных на фильтровальной бумаге. Образцы сухих пятен клинического материала широко используются в неонатальном скрининге наследственных болезней обмена новорожденных, а с 2022 г. официально используются WADA (Всемирной антидопинговой ассоциацией) для допинг-контроля спортсменов, в том числе и на содержание наркотических средств.

В проведенных нами исследованиях отбор проб мочи проводили на фильтровальную бумагу Whatman 903 (США), обеспечивающую хорошую сохраняемость биоматериала и стандартность объема пробы в расчете на единицу площади. Предварительно осуществляли экстракцию выявляемых аналитов из образцов сухих пятен в объем реакционной смеси с последующим переносом смеси в лунки микропланшета. Для анализа использовали иммуночипы, сформированные на дне лунок микропланшета в виде отдельных микрозон диаметром 0,5–0,6 мм, каждая из которых содержала конъюгат сывороточного альбумина с одним видом наркотического средства. Всего было сформировано 8 микрозон для выявления опиатов, кокаина, амфетамина, метамфетамина, метадона, бензодиазепина, барбитуратов и каннабиноидов. Выявление наркотических средств осуществляли методом двухстадийного конкурентного анализа с использованием смеси биотинилированных мышиных моноклональных антител к каждому из перечисленных выше аналитов. В качестве универсального детектирующего реагента использовали стрептавидин, конъюгированный с фосфоресцентной меткой – Pt-копропорфирином. Регистрацию сигнала с иммуночипов осуществляли на биочип-анализаторе ИФИ-05 (ООО ИММУНОСКРИН) путем сканирования дна лунки планшета лучом с длиной волны излучения 365 нм в режиме выделения длительной люминесценции с максимумом 645 нм. Обработка и представление результатов осуществлялись с помощью программных средств биочип-анализатора.

Чувствительность метода определения наркотических средств в пулированных образцах составила 1 нг/мл морфина и метадона, 0,5 нг/мл барбитуратов, 2 нг/мл бензоилэкгонина, метамфетамина, 9-тетра-гидроканнабинола и бензодиазепинов, 8 нг/мл амфетамина, при отсутствии значимых перекрестных реакций. Сухие пятна на фильтровальной бумаге были приготовлены из образцов мочи человека, предоставленных МГМУ им. И. М. Сеченова и Московским наркологическим центром. Образцы мочи были охарактеризованы по результатам химико-токсикологической экспертизы и содержали наркотические соединения в разных сочетаниях и концентрациях. Для анализа использовали отдельные бумажные диски диаметром 5,5 мм, а также пулы из нескольких дисков, включающих 5–40 образцов. Экстракцию аналитов из дисков в присутствии специфических к наркотическим соединениям антител проводили во вспомогательных планшетах, а затем реакционную смесь переносили в лунки микропланшета с иммуночипами. Всего было исследовано 30 сухих образцов мочи, содержащих наркотические средства в разных сочетаниях и концентрациях, и 20 образцов, в которых по результатам химико-токсикологической экспертизы были выявлены различные распространенные лекарственные препараты, но не были детектированы наркотические соединения. Проведенный анализ по технологии ФОСФАН продемонстрировал возможность правильного обнаружения всех восьми наркотических соединений при одновременном исследовании пула из 10 сухих образцов мочи при отсутствии ложноположительных результатов.

Заключение. Предложенный метод анализа с использованием мультиплексных микропланшетных иммуночипов и пулированных сухих образцов мочи может лечь в основу новой методологии скрининга групп населения для выявления наркозависимых лиц.

Количественное содержание васкулярного эндотелиального фактора роста в слезной жидкости у пациентов с окклюзией сосудов сетчатки (Бельская К.И., Казаков С.П.)

Бельская К. И.¹, Казаков С. П.^{2, 3}

¹ ФГБОУ ДПО Российская Медицинская Академия Непрерывного Профессионального Образования МЗ России, г. Москва

² ФГБУ «Главный военный клинический госпиталь им. академика Н. Н. Бурденко» МО РФ, г. Москва

³ ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий ФМБА России», г. Москва

Belskaya K. I., Kazakov S. P.

A STUDY OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR IN TEAR FLUID IN PATIENTS WITH RETINAL VESSEL OCCLUSION

Прогрессирующая ретинальная ишемия при окклюзии центральной вены сетчатки стимулирует экспрессию индуцируемых гипоксией факторов роста, таких как VEGF. На эндотелии и перицитах сосудов сетчатки и хориоидеи были обнаружены рецепторы васкулярного эндотелиального фактора роста-А (vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A). VEGF-A вырабатывается в ответ на гипоксию сетчатки. Исследования подтверждают центральную роль VEGF-A в развитии постокклюзионного макулярного отека, который является основной причиной значимого снижения зрения у пациентов с окклюзией центральной вены сетчатки.

Цель: оценка эндотелиальной дисфункции путем исследования количественного содержания VEGF слезной жидкости у пациентов с различными сосудистыми нарушениями сетчатки.

Проводили исследование пациентов с окклюзией центральной вены сетчатки (n = 32) – I группа, пациентов с окклюзией центральной артерии сетчатки (n=32) – II группа. В качестве контроля были исследованы пациенты без сосудистых нарушений сетчатки (n=32). Группы были сопоставимы по полу и возрасту. Количественное исследование VEGF проводили наборами реагентов компании Вектор-Бест (Россия) методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Для оценки достоверности применяли непараметрический метод Манна–Уитни.

Содержание VEGF в группе контроля составило 1,09 ± 1,09 пг/мл (от 0 пг/мл до 34,93 пг/мл, медиана 0 пг/мл). Среднее содержание VEGF в группе I составило 250,45 ± 18,42 пг/мл (от 111,69 пг/мл до 595,87 пг/мл, медиана 214,33 пг/мл). Среднее содержание VEGF в группе II составило 38,05 ± 10,08 пг/мл (от 0 пг/мл до 221,45 пг/мл, медиана 13,48 пг/мл). Тест Манна–Уитни показал достоверные отличия между группой контроля и I группой (p < 0,00001), между I и II группами (p < 0,00001), а также между группой контроля и II группой (p < 0,00001).

Заключение. Высокий уровень содержания VEGF в слезной жидкости в I группе показывает высокую значимость эндотелиальной дисфункции как патогенетического звена окклюзии центральной вены сетчатки. Содержание VEGF в II группе достоверно выше группы контроля, что показывает вовлеченность эндотелия сосудов сетчатки в патологический процесс окклюзии центральной артерии сетчатки, однако достоверно ниже содержания VEGF в I группе. Это можно объяснить преимущественно эмболическим характером окклюзии центральной вены сетчатки. Неинвазивное исследование маркера VEGF позволяет использовать его в диагностике и последующем мониторинге за течением этого заболевания.

Связь липопротеида(а) с поражением коронарных артерий при остром коронарном синдроме у пациентов моложе 65 лет (Близнюк С.А., Комарова А.Г., Хрусталева А.Н., Емельянова Э.Б., Ежов М.В.)

Близнюк С. А.¹, Комарова А. Г.¹, Хрусталева А. Н.¹, Емельянова Э. Б.¹, Ежов М. В.²

¹ ГБУЗ Городская клиническая больница имени С. П. Боткина Департамента здравоохранения города Москвы, г. Москва

² ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр имени академика Е. И. Чазова» Минздрава России, г. Москва

Bliznyuk S. A., Komarova A. G., Khrustaleva A. N., Emelyanova E. B., Ezhov M. V.

RELATIONSHIP OF LIPOPROTEID(a) WITH CORONARY ARTERY DAMAGE IN ACUTE CORONARY SYNDROME IN PATIENTS UNDER65 YEARS OLD

Липопротеид(а) [Лп(а)] играет значимую роль в реализации сердечно-сосудистых заболеваний. Актуальной задачей является изучение связи Лп(а) с атеросклеротическим поражением коронарного русла у пациентов, госпитализированных с острым коронарным синдромом (ОКС).

Цель: изучение связи уровня липопротеида(а) [Лп(а)] с поражением коронарных артерий у пациентов с острым коронарным синдромом (ОКС) моложе 65 лет.

В исследование включено 303 пациента моложе 65 лет (81% мужчин, медиана возраста – 56 [49;61] лет), госпитализированных в ГБУЗ ГКБ им. С. П. Боткина ДЗМ с диагнозом ОКС в 2022–2023 гг. Всем больным выполнена коронарная ангиография. Стенозирующее поражение коронарной артерии диагностировали при наличии атеросклеротической бляшки, суживающей просвет сосуда ≥50%. Определяли в крови концентрации липидов и Лп(а). Уровень Лп(а) измеряли методом иммуноферментного анализа. Количественные переменные представлены в виде медианы и значений 25-го и 75-го процентилей.

У 59% (n = 178) лиц диагностирован ИМ с подъемом сегмента ST, у 19% (n = 57) пациентов – ИМ без подъема сегмента ST, HC – у 22% (n = 68) участников. Гипертоническую болезнь имели 82% (n = 248) пациентов, сахарный диабет (СД) отмечен у 20% (n = 61) больных, хроническая болезнь почек со снижением скорости клубочковой фильтрации менее 60 мл/мин/1,73 м² зарегистрирована у 12% (n = 36) человек, курили ранее – 25% (n = 76), в настоящее время – 23% (n = 70) участников. Статины исходно принимали 15% (n = 45) человек. При поступлении уровень общего холестерина составил 5,2 [4,4;6,0] ммоль/л, триглицеридов – 1,9 [1,3;2,6] ммоль/л, холестерин липопротеидов высокой плотности (ХС ЛВП) – 1,2 [1,0;1,4] ммоль/л, ХС ЛНП – 3,6 [2,9;4,4] ммоль/л. Медиана Лп(а) составила 23,5 [10,0;55,5] мг/дл. Повышение Лп(а) ≥ 50 мг/дл выявлено у 27% (n = 83) лиц, Лп(а) ≥ 30 мг/дл – у 41% (n = 124) больных. У 7% (n = 26) лиц выявлено поражение ствола левой коронарной артерии, у 67% (n = 204) – передней нисходящей артерии, у 50% (n = 153) – правой коронарной артерии, у 41% (n = 126) – огибающей артерии. Выявлена связь уровня Лп(а) с поражением правой коронарной и огибающей артерии. По данным ROC-анализа наибольшей диагностической значимостью в отношении поражения правой коронарной артерии был Лп(а) ≥ 30мг/дл, при поражении огибающей артерии – Лп(а) ≥ 40 мг/дл. Уровень Лп(а) ≥ 40 мг/дл был связан с наличием поражения огибающей артерии [отношение шансов 1,5; 95% ДИ (доверительный интервал) 1,2–2,0; p < 0,05], а Лп(а) ≥ 30 мг/дл – правой коронарной артерии в [1,4; 1,1–1,8; p < 0,05].

Заключение. Повышение Лп(а) ≥ 30 мг/дл и Лп(а) ≥ 40 мг/дл ассоциировано с увеличением вероятности поражения огибающей и правой коронарной артерии, соответственно.

Ретикулоцитарные индексы гематологических анализаторов как предикторы восстановления эритропоэза у онкогематологических больных на фоне высокодозной химиотерапии и трансплантации костного мозга (Блиндарь В.Н.)

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, г. Москва

Blindar V. N.

RETICULOCYTIC INDICES OF MODERN HEMATOLOGICAL ANALYZERS AS PREDICTORS OF EARLY RESTORATION OF ERYTHROPOIESIS IN ONCOHAEMATOLOGICAL PATIENTS DURING HIGH-DOSE CHEMOTHERAPY AND BONE MARROW TRANSPLANTATION

Активное использование в клинике трансплантации костного мозга требует внедрения новых информативных способов оценки эффективности терапии на ее ранних этапах.

Цель. Выявить диагностическую значимость количества ретикулоцитов (RET) и ретикулоцитарных индексов (IRF и RPI) в оценке восстановления эритропоэза после высокодозной химиотерапии (ВДХ) и трансплантации костного мозга у онкогематологических больных.

Гематологический анализ выполняли на анализаторах Sysmex XE-2100 (Япония) и Mindray ВС-6800Plus (Китай). В исследование включили 49 онкогематологических больных: множественная миелома – 10; лимфома Ходжкина – 14; неходжкинская лимфома – 9; острый лейкоз – 15; саркома Юинга – 1 человек. Больные получали высокодозную химиотерапию (ВДХ) по разным схемам с последующей аутотрансплантацией клеток-предшественников гемопоэза (АУТОК-ПГ). Исследование проводилось в динамике (1–30 сутки), оценивались общее число ретикулоцитов (RET% и RET, абс), фракция незрелых ретикулоцитов (IRF). Рассчитывали ретикулоцитарный индекс (RPI) по формуле: RPI = число ретикулоцитов (%) × HCT/0,45, где HCT – гематокрит, 0,45 – нормальное значение гематокрита. Контрольная группа состояла из 34 практически здоровых людей.

У всех больных на фоне ВДХ, начиная с 4-х суток после АУТОК-ПГ развилась панцитопения, которая продолжалась от 1 до 11 дней, в среднем 9,5 суток. Число лейкоцитов снижалось в среднем до (0,78 ± 0,04) × 10⁹/л, число тромбоцитов – до (20,7 ± 3,2) × 10⁹/л. Анемия была у всех больных; умеренной (HGB 80–94 г/л) или легкой (HGB > 95 г/л). Число RET в контроле составляло (1,0 ± 0,03%) и (51,7 ± 1,6) × 10⁹/л. С 4 по 10 день после АУТОК-ПГ число RET, IRF и RPI практически были нулевые – 0,08 ± 0,02%, 0,01% и 0,00 ед соответственно. Первые признаки восстановления числа RET появлялись раньше, чем восстановление числа лейкоцитов и тромбоцитов. С 10 суток начинался постепенный подъем числа RET, на 12 сутки – 0,9 ± 0,1%; на 20–25 сутки – 1,1 ± 0,1%; на 30 сутки – 1,4 ± 0,4%. Среднее число RET в абсолютных цифрах составляло (5,4 ± 0,8) × 10⁹/л с 4 по 10 день. И только на 30–35 день оно приблизилось к нормальным показателям – (43,2 ± 7,3) × 10⁹/л (0,5–156,4) × 10⁹/л. Восстановление числа RET начиналось с появления незрелых форм RET (IFR – 16,3 ± 0,4%) и RPI (3,9 ± 0,4 ед) начиная с 8–10 суток, тогда как в норме их числа не превышают 8% (2,0–14,0%) и 1–2 ед. На 14 сутки эти показатели составляли (39 ± 1,2%) и (6,3 ± 2,7 ед) соответственно.

Заключение. Фракция незрелых ретикулоцитов (IRF), индекс продукции ретикулоцитов (RPI) являются наиболее важными предикторами не только восстановления эритропоэза, но и восстановления гемопоэза в целом. Они могут быть использованы клиницистами для оценки эффективности аутотрансплантации клеток-предшественников гемопоэза после высокодозной химиотерапии у онкогематологических больных.

Алгоритм биоинформационной обработки данных бисульфитного секвенирования и его использование в диагностике опухолей с клональной гетерогенностью (Бобрик П.Ю., Пахомова И.В., Вертелко В.Р.)

Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минский р-н, д. Боровляны, Республика Беларусь

Bobryk P. Y., Pakhomava I. V., Vertelko V. R.

THE ALGORITHM FOR BIOINFORMATICS PROCESSING OF BISULFITE SEQUENCING DATA AND ITS USAGE IN DIAGNOSIS OF TUMORS WITH CLONAL HETEROGENEITY

Метилирование ДНК является одним из ключевых эпигенетических механизмов регуляции экспрессии генов. Данный механизм обеспечивает модификацию молекулы ДНК без изменения самой последовательности. Зачастую аномальное метилирование приводит к формированию геномной нестабильности, например в случае с гиперметилированием промоторных участков генов-супрессоров опухолей, при котором запускается процесс опухолевой трансформации, характерный для герминогенных опухолей, рака молочной железы, простаты и других опухолей с клональной гетерогенностью. Одним из методов анализа степени метилирования последовательности ДНК является бисульфитное секвенирование. Как и в случае со стандартным секвенированием, для интерпретации результатов исследования необходимо провести биоинформационную обработку данных, полученных из секвенатора.

Цель: разработать алгоритм биоинформационной обработки данных бисульфитного секвенирования, с помощью которого исследователь может определять статус метилирования целевого участка гена.

При биоинформационной обработке данных бисульфитного секвенирования использовались следующие программы: FastQC (v0.12.0), fastp (v0.23.4), Bowtie 2 (v2.5.2), Bismark (v0.22.3), samtools (v1.19). Набор данных для тестирования состоял из 22 парноконцевых библиотек бисульфитного секвенирования. Для автоматизации процесса обработки использовали пользовательский скрипт Python (v3.9). Первым шагом биоинформационной обработки является оценка качества данных секвенирования, которые чаще всего представлены двумя fastq-файлами с прямыми и обратными чтениями (в случае парноконцевых чтений). Для этого нами была использована программа FastQC, генерирующая отчет о качественных и количественных показателях, характеризующих исследуемую библиотеку прочтений. Затем с помощью инструмента fastp осуществляется фильтрация полученных прочтений по качеству и длине и тримминг технических последовательностей (адаптеров). После этого программа Bismark совершает конвертацию референсной геномной последовательности по типу бисульфитной конверсии, а модуль Bowtie 2 ее индексирует и выравнивает на нее данные секвенирования. В результате формируется отчет в формате TXT, в котором указаны количество проанализированных последовательностей, число метилированных/неметилированных цитозинов в CpG контексте, эффективность выравнивания, степень метилирования, а также генерируется BAM-файл, содержащий информацию о выровненных прочтениях и для визуализации которого можно использовать программу IGV (Integrative Genomics Viewer). С помощью samtools оценивали глубину и охват (30Х и 200Х) покрытия.

Разработанный алгоритм использовали при анализе данных секвенирования промоторов генов BRCA1, MGMT, RASSF1, APC и HIC пациентов, страдающих герминогенными опухолями яичка. Установлено, что гиперметилирование промотора хотя бы одного из исследуемых генов встречается в 45,5% случаев. Наиболее часто метилированию подвержены гены RASSF1 (36,4% случаев), HIC1 (25% случаев) и MGMT (22,7% случаев).

Заключение. В результате обзора имеющихся в свободном доступе программных решений для обработки данных секвенирования (в т. ч. бисульфитного секвенирования) был создан биоинформационный алгоритм, позволяющий оценивать степень метилирования целевых участков генов. Данную информацию можно использовать как при первичной диагностике (дополнительный маркер для гистологического типирования опухолей), так и на терапевтическом этапе (риск-адаптированная терапия, таргетная терапия).

Роль лабораторного изучения нутритивного, антиоксидантного и иммунного статуса в преодолении резистентности психических расстройств (Быков Ю.В., Беккер Р.А.)

Быков Ю. В.¹, Беккер Р. А.²

¹ ФГБОУ «Ставропольский государственный медицинский университет», г. Ставрополь

² Университет им. Давида Бен-Гуриона в Негеве, Израиль

Bykov Yu.V., Bekker R. A.

THE ROLE OF LABORATORY STUDYING NUTRITIONAL, ANTIOXIDANT AND IMMUNE STATUS IN OVERCOMING RESISTANCE OF MENTAL DISORDERS

Накоплены данные о связи дефицитов определенных нутриентов, повышенного уровня оксидативного стресса, инсулинорезистентности тканей (включая мозг), воспалительных сдвигов в организме с патогенетическими механизмами развития психических расстройств и с их резистентностью к стандартной психотропной терапии.

Цель: обобщить собственные данные, полученные на выборке полирезистентных пациентов с психическими расстройствами, о частоте у них тех или иных лабораторных изменений и об эффективности соответствующих терапевтических вмешательств в преодолении у них резистентности.

Ретроспективно отобрано 64 пациента обоего пола с резистентными формами психических расстройств, обращавшиеся за консультацией за 20-летний период 2003–2023 гг., в том числе 38 пациентов с резистентными формами депрессивных и тревожных расстройств, 4 пациента с резистентным посттравматическим расстройством, 22 пациента с резистентными эндогенными психозами. Из них у 48 пациентов (75%) были обнаружены нутритивные дефициты – чаще всего витамина D₃, магния, реже – железа, цинка, селена или меди. У 54 из 64 пациентов (84%) были обнаружены клинические или лабораторные признаки инсулинорезистентности – избыточная масса тела или ожирение, преддиабетический тип углеводной кривой, повышенный инсулин крови натощак при нормальном уровне гликемии натощак, повышенный уровень фруктозамина при нормальном уровне гликированного гемоглобина (HbA1c). У 56 из 64 пациентов (87%) были обнаружены признаки повышенного уровня окислительного стресса (гипергомоцистеинемия, повышенный уровень малонилдиальдегида в крови, дефицит пула эндогенных антиоксидантов) и/или воспалительные изменения в крови (повышенный уровень C-реактивного белка, сдвиги лейкоцитарной формулы и цитокинового профиля). Соответствующие для каждого случая терапевтические модификации – спорт, коррекция диеты, дефицитов нутриентов, назначение противовоспалительных препаратов (целекоксиб, статины, низкодозный аспирин), инсулин-сенситизаторов (метформин, фенофибрат), антиоксидантов (куркумин, ресвератрол) – в большинстве случаев позволили улучшить психическое состояние пациентов.

Значение. Изучение нутритивного, антиоксидантного и иммунного статуса пациентов с резистентными психическими расстройствами может помочь выявить причины резистентности и правильно спланировать терапевтическую стратегию. Необходимо более широкое применение лабораторных исследований в психиатрической практике, особенно у резистентных пациентов.

Значение детального изучения функции оси «гипоталамус – гипофиз – надпочечники» для планирования лечения резистентных психиатрических пациентов (Быков Ю.В., Беккер Р.А.)

Быков Ю. В.¹, Беккер Р. А.²

¹ ФГБОУ «Ставропольский государственный медицинский университет», г. Ставрополь

² Университет им. Давида Бен-Гуриона в Негеве, Израиль

Bykov Yu.V., Bekker R. A.

THE SIGNIFICANCE OF A DETAILED STUDY OF THE FUNCTION OF THE HYPOTHALAMIC – PITUITARY – ADRENAL AXIS FOR PLANNING THE TREATMENT OF RESISTANT PSYCHIATRIC PATIENTS

Цель: представить описание двух пациентов с резистентными психическими расстройствами и противоположно направленными изменениями в работе оси «гипоталамус – гипофиз – надпочечники» (ГГН).

В разное время наблюдались два пациента с полирезистентными психическими расстройствами. Пациент № 1, 28-летний мужчина, страдал терапевтически резистентными депрессиями (ТРД). Пациентка № 2, 68-летняя женщина, страдала полирезистентным синдромом жжения в полости рта (СЖПР).

У пациента № 1 были обнаружены выраженная утренняя гиперкортизолемия (1200 нмоль/л в 9 утра) и суточная гиперкортизолурия (2300 нмоль/л), патологический дексаметазоновый тест (менее 50% супрессии) в отсутствие органической патологии оси ГГН. К ремиссии у этого пациента привело антиглюкокортикоидное лечение – мифепристон 600 мг/сут на 14 сут, на фоне психотропной терапии. У пациентки № 2 на фоне психотропной и гормонозаместительной по гипотиреозу терапии сохранялась симптоматика СЖПР (4–6 баллов визуальной аналоговой шкалы, ВАШ). При поиске причин резистентности было обращено внимание на погранично низкий уровень утреннего кортизола в крови (110 нмоль/л в 9 утра). Стимуляционный тест с 1 мкг тетракозактида в/в дал неубедительный ответ коры надпочечников – дельта уровня кортизола через 15 минут и 1 час составила +54 и +148 нмоль/л, при норме более +250 нмоль/л. Пациентке был установлен диагноз субклинического гипокортицизма, добавлено рассасывание утром 12,5 мг (1/2 табл.) сублингвального гидрокортизона. Это привело к исчезновению жжения во рту по утрам. К обеду слабое жжение во рту (1–2 балла ВАШ) возобновлялось. Пациентке было рекомендовано в 14:00 рассасывать еще 6,25 мг (1/4 табл.) сублингвального гидрокортизона. Это привело к становлению ремиссии СЖПР.

Значение. Детальное изучение особенностей функционирования оси ГГН у конкретного психиатрического пациента, проявляющего резистентность к стандартной психотропной терапии, может помочь в планировании стратегии и тактики лечения и в преодолении резистентности.

Мотивация сотрудников как инструмент повышения эффективности медицинской помощи в первичном звене (Валеев В.В., Ламбакахар М.Г., Тараканов Е.А.)

Валеев В. В.¹, Ламбакахар М. Г.^{2, 3}, Тараканов Е. А.⁴

¹ ГБУЗ «Городская поликлиника № 219 ДЗМ», г. Москва

² ФГБОУ ВО Российская академия народного хозяйства и государственной службы при Президенте РФ, г. Москва

³ ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования Министерства здравоохранения России, г. Москва

⁴ Общество с ограниченной ответственностью «Центр семейной медицины» (ООО «ЦСМ»), г. Москва

Valeev V. V., Lambakakhar M. G., Tarakanov E. A.

EMPLOYEE MOTIVATION AS A TOOL TO IMPROVE THE EFFECTIVENESS OF PRIMARY CARE

Внедрение современных информационных систем, единой электронной медицинской карты, дистанционной записи на прием к врачу, телемедицинские технологии, системы электронного документооборота способствуют повышению эффективности оказания медицинской помощи в первичном звене. Одной из актуальных задач, в том числе первичного звена, остается проблема мотивации персонала медицинской организации. Мотивация медицинских сотрудников, включая и тех, кто оказывает медицинскую помощь детскому населению, играет важную роль в социально-экономическом развитии здравоохранения в целом. Это определяет природу стимулирующих мероприятий, направленных на повышение эффективности и качества предоставления первичной медико-санитарной помощи детям.

Цель: анализ деятельности отделения первичной медико-санитарной помощи детям в государственном бюджетном учреждении здравоохранения для рекомендации внедрения разработанного комплексного мотивационного механизма управления персоналом.

В проведенном исследовании сделан анализ деятельности отделения первичной медико-санитарной помощи детям в ГБУЗ «Городская поликлиника № 219 ДЗМ, в том числе и нематериальной мотивации персонала, который показал, что нематериальная мотивация присутствует. Однако степень мотивации низка и далека от совершенной. Исследование было организовано в несколько этапов, каждый из которых был направлен на достижение своей уникальной цели. Каждая стадия включала определенные задачи, объект исследования, единицу наблюдения, источники получаемой информации, материалы исследования, а также анализ показателей проведенного исследования.

В ходе проведенного исследования установлено, что уровень удовлетворенности сотрудника имеет значительное влияние на его мотивационную структуру. Врачи, которые испытывают высокую степень удовлетворенности своей работой, обладают более однородной мотивационной структурой. Для них фактор материального стимулирования играет незначительную роль в сравнении с факторами «морального стимулирования», «страхом потерять работу» и административными мерами воздействия. Если уровень удовлетворенности снижается, организация вынуждена направлять значительные ресурсы на сохранение работоспособности своего персонала и поддержание достаточного уровня активности. Однако увеличение общей удовлетворенности имеет обратный эффект, способствуя оптимизации расходов материальных ресурсов. Для медицинских сестер, работающих в отделении первичной медико-санитарной помощи детям, независимо от уровня удовлетворенности, наиболее значимым факторов трудовой активности является материальное стимулирование. Проведенное исследование показало, что внедрение современного комплексного мотивационного механизма в управление сотрудниками отделения первичной медико-санитарной помощи детям положительно повлияло как на количественные, так и на качественные показатели их деятельности, улучшило качество оказываемой первичной медико-санитарной помощи детскому населению, прикрепленному к медицинской организации. Одним из важных показателей эффективности первичной медико-санитарной помощи является доступность качественного медицинского обслуживания, в том числе времени ожидания медицинской помощи к врачам-специалистам. Кроме того, эффективность первичной медико-санитарной помощи оценивается по результатам лечения – улучшению здоровья пациентов и предотвращению осложнений. Успешное лечение, скорейшее восстановление, минимизация осложнений и снижение повторных обращений за медицинской помощью являются показателями высокой эффективности первичной медико-санитарной помощи.

Заключение. Результаты исследования представляют собой основание для рекомендации широкого внедрения разработанного комплексного мотивационного механизма управления персоналом. При этом необходимо осуществлять постоянный контроль со стороны руководителей структурных подразделений в отношении качества оказываемой медицинской помощи и своевременных корректирующих воздействий.

Характеристика особенности кишечной микробиоты у детей с избыточной массой тела (Валиахметова Д.З., Газизуллина Г.Р., Акрамова Э.Р., Хакимова Л.Р., Гимранова И.А.)²

ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Уфа

Valiakhmetova D. Z., Gazizullina G. R., Akramova E. R., Khakimova L. R., Gimranova I. A.

CHARACTERISTICS OF THE GUT MICROBIOTA IN OVERWEIGHT CHILDREN

Цель: характеристика особенности кишечной микробиоты у детей с избыточной массой.

Были анализированы 20 детей, страдающих от избыточного веса. Для исследования использовали кал в качестве биоматериала. Для определения состава микробиоты кишечника применялся классический метод бактериологического исследования, который позволяет определить как качественный, так и количественный состав микроорганизмов. Для этой цели образцы биоматериала разводили и получали последовательные 10-кратные разведения, которые засевали на чашки Петри с разными селективными средами, обладающими дифференциально-диагностическими свойствами. С помощью масс-спектрометра (MALDI-TOF) идентифицировали представителей микрофлоры, включая аэробные и анаэробные микроорганизмы (Autof MS, Китай).

Из всех образцов были выделены бактерии из родов Bifidobacterium и Lactobacillus, а также типичные представители ЖКТ Escherichia coli. В 7 образцах были обнаружены Staphylococcus haemolyticus, в 6 образцах – Staphylococcus hominis, в 2 образцах – Staphylococcus epidermidis, в 1 образце – Staphylococcus capitis, S. gallolyticus и S. auricularis. Из рода Enterococcus были выделены следующие виды: E. faecium, который присутствовал в трех образцах, E. faecalis в 7 образцах, а E. cloacae в 1 образце. Klebsiella pneumoniae была выделена из двух образцов.

Заключение. Микробиом ЖКТ у детей с избыточной массой тела отличается от здоровых детей; у них преобладают представители видов из типа Firmicutes, тогда, как известно, что у людей с нормальным индексом массы тела больше всего встречаются бактерии типа Bacteroidetes.

Нарушения метаболизма стероидов по данным газовой хромато-масс-спектрометрии у больных адренокортикальным раком с ранними стадиями заболевания (Великанова Л.И., Малеваная Е.В., Стрельникова Е.Г., Шафигуллина З.Р., Ворохобина Н.В.)

ФГБОУ ВО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова» Минздрава России, г. Санкт-Петербург

Velikanova L. I., Malevanaya E. V., Strelnikova E. G., Shafigullina Z. R., Vorokhobina N. V.

STEROID METABOLISM IMPAIR IN PATIENTS WITH EARLY STAGES OF THE ADRENOCORTICAL CANCER ACCORDING TO GAS CHROMATOGRAPHY-MASS SPECTROMETRY

Адренокортикальный рак (АКР) является редким и агрессивным заболеванием. Представляется актуальным изучить особенности стероидного метаболома мочи больных АКР с ранними стадиями заболевания, что открывает новые возможности в ранней диагностике, необходимой для определения тактики лечения.

Цель: изучить стероидные профили мочи (СПМ) методом ГХМС у больных АКР с 1–1V стадиями заболевания для выявления нарушений метаболизма стероидов на ранних стадиях заболевания.

Обследовано 60 больных АКР в возрасте от 18 до 60 лет до проведения хирургического лечения с суммой баллов по L. M. Weiss ≥3 по данным патоморфологического исследования послеоперационного материала. Стадию заболевания устанавливали на основании результатов визуализирующих методов обследования и послеоперационного гистологического исследования по классификации ENSAT: I стадия с размером опухоли 45 (37–50) мм – у 9 (15%), II стадия с размером опухоли 73 (66–99) мм – у 26 (43%) больных. Всем больным методом ГХ–МС определяли экскрецию кортикостероидов с мочой до хирургического лечения. Исследование СПМ методом ГХ–МС с оптимизацией регламента пробоподготовки с использованием жидкостной экстракции проводили на хромато-масс-спектрометре Shimadzu GCMS – TQ8050 в Научно-исследовательской лаборатории хроматографии СЗГМУ им. И. И. Мечникова. Метод позволяет определять экскрецию с мочой более 70 стероидов. Статистическую обработку данных осуществляли с использованием программных пакетов Statistica (вер. 10.0) и MedCalc. Для сравнения результатов использовался непараметрический критерий Манна–Уитни. Количественные характеристики обследованных представлены в виде медианы (Ме), 25-го и 75-го перцентилей (Q₂₅–Q₇₅). Статистически значимым считали значение p < 0,05. 25 здоровых доноров составили группу контроля.

Установлены положительные корреляционные связи со стадией заболевания тетрагидро-11-дезоксикортизола (THS), 16-oxo-андростендиола (16-oxo-dA2) и прогестагенов, отрицательная корреляционная связь соотношения 3α,16,20-прегнентриола (3α,16,20-dP3) к 3β,16,20-dP3. У больных АКР с 1 стадией заболевания определен 4-й вариант СПМ, связанный с отсутствием различий ЭМ андрогенов и THS с показателями здоровых доноров. У данных пациентов установлено увеличение экскреции с мочой прегнандиола (Р2) и 3α,16,20-dP3, экскреция с мочой THS составила менее 300 мкг/сут. Только у пациентов с 1 стадией заболевания отмечено статистически значимое повышение соотношения Р2/Р3 до 1,68 (1,30–3,25) в сравнении с ГК 0,92 (0,45–1,29, p = 0,01. У больных с II стадией АКР установлены различные нарушения адреналового стероидогенеза: у 11 (42,3%) пациентов – увеличение экскреции с мочой дегидроэпиандростерона (DHEA) и THS (1-й вариант СПМ), у 9 больных повышение DHEA при уровнях THS в области референсных значений (2-й вариант СПМ), у 5 больных – увеличение THS в сочетании с уровнями андрогенов в области референсных значений (3-й вариант СПМ). Только у 1 пациента с II стадией АКР выявлен 4-й вариант СПМ. У всех больных с I и II стадией АКР была увеличена экскреция с мочой прогестагенов.

Заключение. Методом ГХМС получены различные нарушения метаболизма стероидов у больных АКР с I и II стадиями заболевания. Для больных АКР с 1 стадией заболевания, с размером опухоли менее 50 мм, характерно отсутствие различий экскреции с мочой DHEA и THS, повышение экскреции с мочой прегнандиола и соотношения прегнандиола к прегнантриолу в сравнении с группой контроля. У большинства больных с II стадией АКР получен 1-й вариант СПМ с увеличением экскреции с мочой DHEA и THS. Таким образом, методом ГХ–МС получена различная метаболомика стероидов для больных АКР на I и II стадиях заболевания, что является важным для подтверждения стадии заболевания до хирургического лечения и открывает новые возможности в ранней диагностике АКР, необходимой для определения тактики лечения.

Биомаркеры острого клеточного отторжения трансплантированного сердца и их сочетание (Великий Д.А., Гичкун О.Е., Шарапченко С.О., Можейко Н.П., Шевченко О.П.)

Великий Д. А.¹, Гичкун О. Е. ^{1, 2}, Шарапченко С. О.¹, Можейко Н. П.¹, Шевченко О. П.^{1, 2}

¹ ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В. И. Шумакова» Минздрава РФ, г. Москва

² ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)», г. Москва

Velikiy D. A., Gichkun O. E., Sharapchenko S. O., Mozheiko N. P., Shevchenko O. P.

BIOMARKERS OF ACUTE CELLULAR REJECTION OF A TRANSPLANTED HEART AND THEIR COMBINATION

Основным барьером на пути к успешной реабилитации пациентов после трансплантации сердца (ТС) выступает реакция отторжения, риск развития которой существует на протяжении всей последующей жизни реципиента с момента трансплантации. Объективным методом верификации степени и характера отторжения является эндомиокардиальная биопсия (ЭМБ).

Цель: выявить малоинвазивные лабораторные биомаркеры острого клеточного отторжения сердечного трансплантата и оценить диагностическую значимость тестов на их основе.

В исследование вошли 83 реципиента сердца в возрасте от 16 до 64 (48,4 ± 13,1) лет. Уровень экспрессии miR-101 измеряли в плазме венозной крови методом количественной ПЦР; концентрацию ST2 определяли иммуноферментным методом. Диагностическая значимость биомаркеров определялась с использованием ROC-анализа.

У 44 реципиентов по данным ЭМБ верифицировано острое клеточное отторжение (ОКО) трансплантата. Установлены значимые диагностические показатели развития ОКО трансплантированного сердца. В группе реципиентов с ОКО трансплантата (R1G–R3G степени по классификации ISHLT-2004), верифицированного по результатам ЭМБ, уровень экспрессии miR-101 был значимо ниже (р = 0,004), чем у реципиентов без признаков отторжения в трансплантате. Относительный риск выявления ОКО трансплантированного сердца с экспрессией miR-101 ниже рассчитанного порогового уровня (–8,36 отн. ед.) достоверно составил RR = 1,92 [95% ДИ 1,394–2,634], p = 0,0001. Концентрация ST2 в крови реципиентов с острым клеточным отторжением трансплантата достоверно выше, чем у реципиентов без отторжения 38,90 [20,92; 87,93] нг/мл и 21,72 [15,17; 29,37] нг/мл соответственно, p = 0,017. Диагностически значимая пороговая концентрация ST2 в отношении выявления острого отторжения установлена на уровне 36,84 нг/мл, при концентрации ST2 выше порогового уровня достоверно составил RR = 2,27 ± 0,226 [95% ДИ 1,460–3,537] (р = 0,0003). Риск развития острого отторжения при сочетании тестов на miR-101 и ST2 составляет RR = 4,00 [95% ДИ 1,712–9,347], p = 0,0014 при чувствительности и специфичности теста 66,7% и 100%, соответственно.

Заключение. Дуплексное определение уровней miR-101 и ST2 в плазме крови реципиентов сердца повышает диагностические характеристики теста в отношении выявления пациентов с ОКО.

Взаимосвязь уровня антинуклеарных антител с клинико-иммунологическими субтипами системной красной волчанки (Верижникова Ж.Г., Авдеева А.С., Попкова Т.В.)

ФГБНУ Научно-исследовательский институт ревматологии им. В. А. Насоновой

Verizhnikova Zh.G., Avdeeva A. S., Popkova T. V.

THE RELATIONSHIP OF THE LEVEL OF ANTINUCLEAR ANTIBODIES WITH CLINICAL AND IMMUNOLOGICAL SUBTYPES OF SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

Цель: оценить уровни антинуклеарных антител (АНА) в зависимости от клинико-иммунологических субтипов системной красной волчанки (СКВ).

Исследованы сыворотки 94 пациентов с диагнозом СКВ (критерии SLICC, 2012), из них 80 женщин и 14 мужчин, возраст (Медиана, [25-й;75-й перцентили] 31 [27;47] лет, длительность заболевания 84,0 [24,0;168,0] месяцев. Были исследованы следующие клинические проявления: поражение кожи/слизистых оболочек, почек, ЦНС, конституциональные проявления, серозиты, гематологические нарушения. АНА определялись в два этапа: методом непрямой реакции иммунофлюоресценции на клетках типа HEp-2 (НРИФ-Hep-2) при помощи автоматизированной платформы Aklides (Medipan GmbH, Германия) и методом мультиплексного иммунного анализа (МИА) на основе магнитных микросфер при помощи тест-системы BioPlex^® 2200 ANA Screen (Laboratories Inc. Hercules, CA, США). Позитивные результаты измерения АНА соответствовали следующим значениям: НРИФ-Hep-2 ≥ 1/160; метод МИА – для антител к двуспиральной (дс) ДНК ≥ 10,0 МЕ/мл; для других АНА (aSm, aSS-A/Ro, aSS-B/La, антител к нуклеосомам, рибосомальному белку P (RibP), рибонуклеопротеину (РНП-70)) ≥ 1,0 AI (Antibody Index).

У пациентов с СКВ с поражением почек, серозитами, гематологическими нарушениями, поражением кожи/слизистых оболочек были выявлены повышенные уровни антител к дсДНК, нуклеосомам и RibP: антитела к дсДНК в группе пациентов с поражением почек (14,5 [7,0–68,0]), серозитами (45,0 [9,0–70,0]) и гематологическими нарушениями (22,0 [9,0–70,0]); антитела к нуклеосомам в группе пациентов с поражением почек (3,7 [0,5–8,0]), серозитами (5,7 [0,7–8,0]) и гематологическими нарушениями (8,0 [0,7–8,0]); антитела к RibP в группе пациентов с поражением кожи/слизистых оболочек (0,3 [0,2–0,8]) и гематологическими нарушениями (0,3 [0,2–0,6]). У пациентов без данных клинических проявлений уровни антител были ниже (см. таблицу).

Взаимосвязь уровня АНА с активностью заболевания и наличием или отсутствием клинических проявлений

Выводы. Развитие патологического процесса при СКВ сопровождается образованием широкого спектра аутоантител. Определенных АНА ассоциируется с разными клинико-иммунологическими субтипами СКВ и может быть полезно для персонификации терапии.

Метод ImmunoCAP^® – золотой стандарт аллергодиагностики при правильной интерпретации результатов (Воронцова И.М., Баранов А.А.)

ФГБОУ Ярославский государственный медицинский университет МЗ РФ, г. Ярославль

Vorontsova I. M., Baranov A. A.

THE IMMUNOCAP^® METHOD IS THE GOLD STANDARD FOR ALLERGY DIAGNOSTICS WITH THE CORRECT INTERPRETATION OF THE RESULTS

Цель лабораторных исследований при подозрении на аллергическое заболевание состоит в выявлении причинно-значимых аллергенов, ответственных за развитие патологии у пациента. При аллергообследовании необходимо выявить специфические IgE в сыворотке крови и определить их количество.

В арсенале клинических лабораторий имеется широкий спектр методов аллергологических исследований. Метод ImmunoCAP^® в настоящее время рассматривается в качестве референсного стандарта лабораторной аллергодиагностики. При выполнении методики используются как экстракты аллергенов, так и рекомбинантные молекулы аллергенов. В технологии ImmunoCAP твердой фазой служит трехмерная активированная целлюлозная губка, на которую нанесены аллергены в количестве 1–2 мкг, что создает условия избытка аллергена. Данный факт исключает влияние специфических IgG на конечный результат измерения.

Использование целлюлозы в ImmunoCAP необходимо иметь в виду, поскольку содержащиеся в ней перекрестно-реагирующие углеводные детерминанты (CCD) могут быть причиной перекрестных реакций. IgE против CCD обнаруживаются в 20–25% сывороток пациентов-атопиков, показывая положительные, но нерелевантные в клиническом отношении результаты тестов с экстрактами из пыльцы, растительной пищи, латекса и ядов насекомых. Целлюлоза, используемая в качестве твердофазного носителя аллергена, содержит различное количество CCD, достаточное для того, чтобы вызвать ложноположительные результаты теста до 2 kUA/L при тестировании как с экстрактами аллергенов, так и с негликозилированными рекомбинантными аллергенами у пациентов с высоким уровнем анти-CCD IgE антител. Клиницисты должны знать, что слабоположительные результаты ImmunoCAP до 2 kUA/L могут быть ложноположительными и, следовательно, должны интерпретироваться с осторожностью.

В больших когортных исследованиях от 20% до 25% сывороток пациентов оказались CCD-положительными, достигая 35% у подростков и превышая 50% в группах пациентов с аллергией к пыльцевым, пищевым аллергенам и ядам насекомых. В большинстве случаев уровень IgE к CCD невысок – от 0,35 до 3,5 kUA/L, но в 10% – 15% случаев может показывать высокий результат – от 7 до 10 kUA/L, что может приводить к риску ложноположительной оценки результатов.

Использование в исследованиях аллергенов как природного происхождения, так и рекомбинантных может приводить к разночтению результатов по ряду причин. Самыми частыми могут быть следующие ситуации:

1. Аллергенный экстракт положительный, молекулярные компоненты отрицательны. Причинами являются меньшая чувствительность молекулярных компонентов по сравнению с экстрактами, а также связывание специфических IgE с молекулами экстракта, отсутствующими в настоящее время в компонентной диагностике.

2. Аллергенный экстракт отрицательный, молекулярные компоненты положительны. Такое разночтение может быть при меньшей чувствительности метода с использованием натуральных экстрактов, чем при использовании молекул. При этом сывороточный IgE может связываться с молекулярными компонентами, отсутствующими или присутствующими в малых количествах в используемом экстракте, поскольку одним из недостатков натуральных экстрактов является неоднородность состава разных лотов аллергенов.

Заключение. Метод ImmunoCAP предлагает большой спектр тестируемых аллергенов для лабораторной диагностики. При этом необходимо знать особенности метода и факторы дополнительного влияния на конечный результат исследования, что поможет врачу правильно интерпретировать результаты. Это особенно важно при выявлении причинно-значимых аллергенов из группы пищевых аллергенов и ядов перепончатокрылых, поскольку они могут быть причиной тяжелых системных реакций вплоть до анафилактического шока. Наличие высокого уровня анти-CCD IgE антител у пациента может оказать влияние на конечный результат определения сенсибилизации к тому или иному аллергену. Неверная интерпретация ложноположительного результата лабораторного исследования при этом может служить аргументом для назначения низкоэффективной аллерген-специфической терапии.

Диагностическая эффективность быстрой оценки адекватности материала чрезкожной пункционной биопсии опухолей поджелудочной железы (Воропаева Я.Ю., Путова М.В., Колесова Е.Н., Носкова К.К.)

ГБУЗ «Московский научный центр имени А. С. Логинова» ДЗМ, г. Москва

Voropaeva Ya. Yu., Putova M. V., Kolesova E. N., Noskova K. K.

EFFECTIVENESS OF DIAGNOSTIC THE ROSE METHOD IN THE DIAGNOSIS OF PANCREATIC TUMORS

Чрезкожная пункционная биопсия достаточно распространенный метод получения материала для гистологического исследования. Известно, что метод оценки материала на месте (ROSE) сокращает количество неинформативных пункций, позволяя тут же определить информативность полученного образца и повторить исследование.

Цель: оценить диагностическую эффективность чрезкожной пункционной биопсии опухолей поджелудочной железы и влияние метода Rapid on-site evaluation (ROSE) на информативность цитологической диагностики.

В период с января 2022 г. по декабрь 2023 г. в Московском Клиническом научном центре имени А. С. Логинова было проведено 125 трепан-биопсий новообразований поджелудочной железы для 115 больных с использованием ROSE. Из них 50 мужчин и 65 женщин, средний возраст составил 64 года (38–86). При получении трепан-биоптата материал отпечатывали на стекле, окрашивали экспресс-методом, затем немедленно проводили цитологическую оценку. При отсутствии диагностического материала, биопсию повторяли. Во всех случаях проводилось последующее цито-гистологическое сопоставление результатов.

Аденокарцинома обнаружена в 91 случае (79%), нейроэндокринные опухоли в 10 случаях (8,6%), доброкачественные образования 6 случаев – 5%, лимфомы 1 случай – 0,8%, злокачественные неэпителиальные новообразования 1 случай – 0,8%, тяжелые дисплазии 2 случая – 1,6%, мезенхимальные опухоли 2 случая – 1,6%, неинформативный материал 3 случая – 2,6%. Повторная пункция потребовалась в 9 случаях, при этом в 8 случаях последующий материал являлся информативным.

Заключение. При применении ROSE чувствительность чрезкожной пункционной биопсии составила 95%, диагностическая точность метода – 90%. Применение ROSE позволило повысить информативность диагностики на 7,75%, а также улучшить логистику в учреждении, сократить сроки назначения терапии, затраты, связанные с повторной биопсией.

Клиническое и правовое регулирование выбора назначений лабораторных исследований: «интерпретировать» нельзя «отменить» (Вострикова Ж.И.)

ГБУЗ МО «Одинцовская областная больница», г. Одинцово, Московская область

Vostrikova Z. I.

CLINICAL AND LEGAL REGULATION OF THE CHOICE OF LABORATORY RESEARCH APPOINTMENTS: «INTERPRET» CANNOT BE «UNDONE»

Современные реалии в сфере лабораторной медицины диктуют тенденции изменения роли специалиста клинической лабораторной диагностики – усиление консультативной деятельности от начала назначений и выбора тестов клиническим коллегой (с учетом уровня доказательности и целесообразности), до постановки диагноза с использованием результатов высокотехнологичных методов лабораторных исследований. Ограничения по использованию высокотехнологичных тестов накладывают рамки бюджетирования, как по ОМС, так и экономической обоснованностью из прочих источников финансирования.

Цель: обосновать логику действий лабораторного сообщества по замене устаревших на современные лабораторные исследования, ориентированные на итоговый эффект для дальнейшей клинической тактики.

Наиболее значимые для нашей деятельности акценты, чтобы полноправно и коллегиально решить вопросы по выведению устаревших и нецелесообразных клинических лабораторных тестов из регламента, четко обозначены в основных нормативных правовых актах: Федеральном законе от 21.11.2011 № 323-ФЗ (последняя редакция от 25.12.2023) «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» (с изм. и доп., вступ. в силу с 05.01.2024), приказе Минздрава России от 18.05.2021 № 464н (ред. от 23.11.2021) «Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований» (Зарегистрировано в Минюсте России 01.06.2021 № 63737), Национальном стандарте РФ ГОСТ Р 53079.3-2008 «Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила взаимодействия персонала клинических подразделений и клинико-диагностических лабораторий медицинских организаций при выполнении клинических лабораторных исследований» (утв. и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18.12.2008 № 553-ст), введенный в действие с 2010 г.

Специалистам клинико-диагностического направления вместе с коллегами-клиницистами следует пересмотреть используемый набор тестов, согласно Порядков оказания медицинской помощи, Клинических Рекомендаций, чтобы по итогу отказаться от исследований с низким уровнем значимости и доказательности, которые не приносят клинической пользы, не стандартизованы, трудозатратны и неэкономичны. В большинстве случаев альтернативные тесты уже предложены и доступны для применения в клинической практике. Но массово клинические специалисты продолжают назначать и использовать устаревшие атавизмы. А сомнительный результат – увеличивает время диагностики и лечения пациента, при этом создавая и необоснованный расход бюджетных средств (ФОТ, амортизация, расходные материалы, риски, прочее).

В качестве примера, и с чего мы могли бы начать практику «пересмотра подхода выбора лабораторных тестов» и где уже существуют более специфические и альтернативные исследования, хочется указать: ВСК, ДК, РФМК, ЦП в ОАК, Тромбоциты по Фонио, отдельно тест ПТИ, пробы Реберга и тимоловая. Далее, рассмотреть вопрос и целесообразности назначений некоторых стандартизованных и обязательных тестов, но на этапе амбулаторной подготовки к госпитализации, согласно уже действующим НПА – например, обоснованность иммуногематологических исследований перед стационарным лечением. Стоит рассмотреть также и вариант замены теста, такого как СОЭ, физически энергоемкого для пациентов (особенно маленьких детей), но который присутствует в ФСЛИ – ввиду наличия альтернативного и стандартизованного, – на определение СРБ (что давно уже реализовано во многих странах с высоким уровнем доказательной медицины). Пришло время – начать работу в этом направлении!

Заключение. Необходим грамотный диалог с клиницистами, направленный на общую цель качественной и стандартизованной медицинской помощи во благо пациента. Необходима интеграция специалистов лабораторной медицины при редактировании Клинических Рекомендаций, Стандартов оказания МП, Порядков оказания МП по видам и т. д. Тем более, наши профессиональные сообщества уже объединены в рамках Национальной Медицинской Палаты.

Значение определения остеоактивина в сыворотке крови в костном метаболизме (Гасанова Н.А., Исмаилов А.А., Оруджалиева Г.А.)

Научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии, г. Баку, Азербайджан

Hasanova N. A., Ismailov A. A., Orujalieva G. A.

THE IMPORTANCE OF DETERMINING OSTEOACTIVIN IN BLOOD SERUM IN BONE METABOLISM

Остеоактивин – гликопротеин, специфический биорегулятор, вырабатывается при дифференцировке остеобластов, увеличивает дифференцировку остеокластов при ремоделировании кости, но ослабляет их функциональную активность.

Цель: изучение роли остеоактивина в восстановлении остеопоротических переломов.

В исследование включено 54 пациента в возрасте старше 45 лет, обратившихся в Азербайджанский Научно-Исследовательский Институт Травматологии и Ортопедии. Эти пациенты были разделены на группы: больные остеопорозом, пациенты с переломами и здоровые люди. I группа – 14 человек с остеопорозом, 40 человек с переломами и 14 человек были отнесены в группу здоровых людей. Остеоактивин определялся в сыворотке крови больных 3 раза: в первый день, через 10 дней и через 1 месяц. Определение ОА в сыворотке крови проводили иммуноферментным (ИФА) методом с использованием набора реагентов «Бостер» на иммуноферментном анализаторе «Mindray MR-96A». Индикаторы анализировались в статистическом пакете SPSS26.0. Качественный анализ изменений показателей проверяли по критерию Хи-квадрат Пирсона (критерий Anova), статистическую достоверность проверяли по критерию Вилкоксона.

На фоне лечения в течение 1 месяца в группе с остеопорозными переломами концентрация остеоактивина увеличивалась. Значительное повышение остеоактивина наблюдалось у больных в возрасте от 61–70 лет. Тот факт, что содержание остеоактивина, играющего важную роль в восстановлении переломов, увеличивается в 2,0 раза при переломах через 1 месяц после лечения и не меняется при остеопорозных переломах, объясняет более позднее заживление остеопоротических переломов.

Заключение. Остеоактивин с показателями чувствительности и специфичности является тестом с высокой общедиагностической ценностью и информативностью в прогнозировании переломов при остеопорозе и может играть важную роль в адекватном лечении переломов.

Лекарственный мониторинг при трансплантации солидных органов (Гичкун О.Е.)

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В. И. Шумакова»

Gichkun O. E.

THERAPEUTIC DRUG MONITORING IN SOLID ORGAN TRANSPLANT RECIPIENTS

В 2023 году в Российской Федерации было выполнено более 3000 трансплантаций солидных органов. Среди них около 1800 трансплантаций почки, более 800 трансплантаций печени, почти 400 трансплантаций сердца и 19 трансплантаций легких.

Цель: представить значимость лекарственного мониторирования при трансплантации органов и тканей.

Важной составляющей в ведении реципиентов солидных органов является пожизненный прием иммуносупрессивных препаратов. К базовым иммуносупрессивным препаратам у реципиентов солидных органов относятся ингибиторы кальциневрина (такролимус, циклоспорин А), ингибиторы пролиферативного сигнала (сиролимус, эверолимус), кортикостероиды, микофеноловая кислота и др. Проблема подбора режима иммуносупрессии после трансплантации органов является актуальной ввиду того, что такролимус – препарат с узким терапевтическим окном: недостаточная доза препарата может привести к отторжению органов и тканей, избыточная – к увеличению риска инфекций, токсичности, злокачественным новообразованиям у реципиентов трансплантированных органов. Начальная иммуносупрессия подбирается эмпирически из расчета массы тела реципиента и режима приема два раза в день, далее учитываются биохимические показатели и уровень препарата в крови. Мониторинг лекарственных препаратов в большинстве лабораторий проводят с помощью иммунохимического анализа. При исследовании оценивают остаточную концентрацию, то есть уровень препарата в крови через 12 часов после последнего приема. Среди реципиентов, принимающих одинаковую дозу, уровень лекарственных препаратов в крови может сильно варьировать и зависит от многих факторов, по этой причине нет установленных референтных значений для его концентрации. Ежегодно в НМИЦ ТИО имени ак. В. И. Шумакова выполняется более 25 000 определений концентрации иммуносупрессивных препаратов (такролимус, циклоспорин, эверолимус) в крови, накоплен большой опыт о взаимосвязи полученных результатов с рутинными лабораторными данными и клиническими исходами трансплантации.

Заключение. Лабораторный мониторинг иммуносупрессивных препаратов является важным исследованием у реципиентов солидных органов в посттрансплантационном периоде.

Выявление мутаций в гене kras методом масс–спектрометрии (Главацкая А.А., Куклина Н.Г., Шипулин Г.А.)

ФГБУ «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» ФМБА России

Glavatskaya A. A., Kuklina N. G., Shipulin G. A.

DETECTION OF MUTATIONS IN KRAS GENE USING MASS SPECTROMETRY

Ген KRAS является членом семейства RAS и представляет собой классический и наиболее часто мутирующий онкоген у человека. Мутации этого гена встречаются в более чем 30% случаев колоректального рака, а также при аденокарциноме легких, раке поджелудочной железы и других. Активирующие мутации гена KRAS приводят к последовательной активации пути RAS-RAF и действуют как предикторы устойчивости к терапии ингибиторами EGFR [2, 3]. В связи с этим анализ наличия и спектра мутаций в гене KRAS является необходимым при назначении лекарственной терапии таргетными препаратами. Для оценки мутационного статуса применяются следующие методы: различные варианты ПЦР в реальном времени, секвенирование по Сэнгеру и масс-спектрометрия с матричной лазерной ионизацией.

Цель: разработка и апробирование на контрольных образцах мультиплексной панели для выявления мутаций в гене KRAS методом масс-спектрометрии.

Отобраны 30 мутаций в гене KRAS (2,3,4 экзон) на основе Клинических рекомендаций «Рак прямой кишки» и «ЗНО ободочной кишки». Дизайн олигонуклеотидов осуществляли с помощью программного обеспечения Assay Design Suite, доступного в он-лайн режиме на сайте www.agenabio.com («Agena Bioscience», США). Процедуру подготовки аналитов, включающую в себя три этапа: мультиплексная ПЦР, SAP-реакция и реакция удлинения iPlex, проводили с помощью реагентов «PCR Reagent Set, medium» («Agena Bioscience», США). В качестве объектов исследования использовали образцы геномной ДНК U-937, экстрагированную из клеток диффузной гистиоцитарной лимфомы (Sibenzyme, Россия), с концентрацией 5 нг/мкл. Контрольные образцы мутаций гена KRAS были синтезированы путем сайт-направленного мутагенеза на основе ПЦР. Из них были приготовлены смешанные образцы с относительной чувствительностью – 50%, 5%, 1%, 0,1%. Мультиплексное генотипирование проводили на автоматизированном генетическом анализаторе MassArray («Agena Bioscience», США). Для анализа масс-спектров в реальном времени, а также для первичной обработки и документирования результатов опыта использовали программное обеспечение «MassArray Typer 4.0» («Agena Bioscience», США).

В ходе экспериментов, проведенных на геномной ДНК U-937 дикого типа с концентрацией 5 нг/мкл, были получены одиночные пики, соответствующие массам пиков нормального аллеля, что говорит о высоком уровне специфичности системы. При анализе смешанных контрольных образцов, состоящих из мутантных клонов и геномной ДНК U-937, были получены по два пика, соответствующие пику нормального аллеля и пику мутантного аллеля. Наличие пиков в образцах с относительной чувствительностью равной 0,1% говорит о высоком уровне чувствительности.

Заключение. Разработанная система позволяет детектировать мутации с низкой концентрацией. Высокая степень мультиплексирования позволяет за короткое время провести анализ выбранных SNP. В дальнейшем планируется валидация данной системы на клинических образцах.

Направления деятельности кафедры клинической лабораторной диагностики с курсом лабораторной иммунологии рманпо в условиях индустриализации лабораторной службы (Годков М.А., Долгов В.В.)

РМАНПО Минздрава России, г. Москва

Godkov M. A., Dolgov V. V.

DIRECTIONS OF ACTIVITY OF THE DEPARTMENT OF CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS WITH A COURSE OF LABORATORY IMMUNOLOGY IN CONDITIONS OF INDUSTRIALIZATION OF LABORATORY SERVICES

Централизация, цифровизация, применение высокотехнологических лабораторных поточных систем вытесняют ручной труд при скрининговых лабораторных исследованиях, результаты которых используются при диспансеризации, первичном приеме у врача, госпитализации.

Цель: определить задачи кафедры последипломной подготовки специалистов в меняющихся условиях функционирования лабораторной службы.

Государственная политика в области здравоохранения строится на бесплатной медицинской помощи в рамках госгарантий, которые, в свою очередь, увязаны с клиническими рекомендациями, стандартами и протоколами оказания медицинской помощи по разным клиническим направлениям. Лабораторной диагностике, как и другим диагностическим специальностям, отводится роль междисциплинарной деятельности. Компетенции специалистов лабораторной службы определяются профессиональным стандартом «Специалист в области клинической лабораторной диагностики» (приказ Минтруда РФ от 14 марта 2018 г. № 145н). Этим приказом регламентируется деятельность специалистов клинической лабораторной диагностики с высшим медицинским и немедицинским образованием, которая разнится в том, что врачи клинической лабораторной диагностики должны консультировать врачей других специальностей и пациентов по вопросам лабораторных исследований, а биологам медицинских лабораторий эта обязанность не вменяется. Кафедра КЛД РМАНПО корреспондирует свою деятельность на основе вышеизложенных положений.

Подготовка врачей и биологов для лабораторной службы строится по отдельным учебным программам, сходным в части аналитической компоненты и разным по интерпретации результатов. При первичной профессиональной переподготовке очно всем курсантам с медицинским и немедицинским образованием дается информация по аналитическим характеристикам методов лабораторного исследования и материалы для формирования лабораторного заключения, для врачей клинической лабораторной диагностики дополнительно предоставляется клиническая интерпретация, часто с привлечением врачей клинических специальностей. При повышении квалификации и врачам, и биологам информация может доводиться в дистанционном формате, обучение ведется по разным программам.

Бюджетные плановые циклы строятся на основе квалификационных требований профессионального стандарта, что закреплено в соответствующих учебных программах и заложено в финансово-экономических планах работы РМАНПО и учебных планах кафедры. Внебюджетные циклы проводятся кафедрой по технологиям, выходящим за рамки госгарантий, представлены высокотехнологичными лабораторными исследованиями, например: «Цитологическое исследование при патологии шейки матки», «Менеджмент лабораторных процессов в меняющихся условиях», «Лабораторные исследования системы гемостаза», «Проточная цитометрия в онкогематологии» и другие.

Лечебная деятельность сотрудников кафедры является залогом неразрывной связи с профессиональным сообществом. В настоящее время многие преподаватели совмещают работу на кафедре с работой в КДЛ разных медицинских организаций. В планах кафедры – создать производственную учебно-диагностическую лабораторию, на базе которой будут проводиться: практическая подготовка ординаторов, научно-исследовательская работа аспирантов и соискателей, производственная работа под патронажем профессорско-преподавательского коллектива кафедры.

Общественная деятельность преподавателей кафедры обширна, включает работу в профессиональных общественных организациях, диссертационных советах, комиссиях по аккредитации и аттестации, редакциях журналов, организацию конференций и школ по конкретным направлениям профессиональной деятельности. Кафедра старается отвечать на запросы специальности, готовя атласы, руководства, учебные пособия.

Заключение. Разносторонняя профессиональная деятельность позволяет кафедре КЛД РМАНПО быть востребованной в динамически меняющихся условиях модернизации здравоохранения и индустриализации лабораторной службы.

Особенности интерпретации профилей оксилипинов в биологических жидкостях как маркеров воспалительных состояний (Горбатенко В.О., Сергеева М.Г., Чистяков Д.В.)

Горбатенко В.О.¹, Сергеева М. Г.², Чистяков Д. В.²

¹ Факультет Биоинженерии и Биоинформатики, МГУ им. М. В. Ломоносова

² Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А. Н. Белозерского, МГУ им. М. В. Ломоносова, г. Москва

Gorbatenko V. O., Sergeeva M. G., Chistyakov D. V.

INTERPRETATION FEATURES OF OXYLIPIN PROFILES IN BIOLOGICAL FLUIDS AS MARKERS OF INFLAMMATORY CONDITIONS

Цель: разработка новых платформ к анализу и интерпретации данных инструментального анализа и омиксных технологий.

Проведен анализ количественных данных профилей оксилипинов, получаемых методом ВЭЖХ–МС/МС. Оксилипины (более 200 идентифицированных соединений) – биологически активные вещества, которые образуются при оксигенировании полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК). Комплексный профиль оксилипинов рассматривается как перспективные маркеры онкологических состояний, неврологических нарушений и системных заболеваний с воспалительной компонентой. ПНЖК метаболизируются до оксилипинов по разным полиферментным каскадам: циклооксигеназная ветвь (COX), липоксигеназная ветвь (LOX), эпоксигеназная ветвь (CYP) метаболизма оксилипинов, дополнительно выделяют превращение ПНЖК по анандамидному пути и неферментативный путь окисления. Наиболее изученными соединениями в контексте заболеваний являются такие производные С20:4ω-6 арахидоновой кислоты, как эйкозаноиды (простагландины, тромбоксаны, лейкотриены), производные С22:6ω-3 докозагексаеновой, С20:5ω-3 эйкозапентаеновой, С18:2ω-6 линолевой кислоты. Обычная статистическая обработка профилей оксилипинов может не давать полной картины изменения в биохимических путях при исследуемых состояниях. Эффекты оксилипинов могут суммироваться, достигая значимых результатов при незначительном изменении каждого отдельного соединения. Мы предлагаем методологию оценки изменения профилей оксилипинов, основанную на трех подходах:

1) суммирование концентрации метаболитов по их кислотам-предшественникам, что позволяет оценивать влияние поступающих извне ПНЖК;

2) суммирование концентрации метаболитов по ключевым ферментам их биосинтеза (COX, LOX, CYP, AEA, неферментативный), что позволяет оценивать активацию или ингибирование отдельных биохимических путей, и предлагать их как мишени действия лекарственных средств при соответствующих патологиях;

3) суммирование концентраций метаболитов, сгруппированных их функциональным свойствам, такой анализ соотношения про- и анти-воспалительных липидных медиаторов позволяет получить информацию о смещении состояния организма в сторону разрешения, или активации воспаления.

В клиническом исследовании пациентов с болезнью Паркинсона (БП) (73 пациентов с различными стадиями заболевания и 36 здоровых контролей), предложенный подход к анализу данных позволил выявить активацию СОХ-пути биосинтеза оксилипинов у пациентов с поздними стадиями БП (3–4 по шкале Хен и Яра), что показывает перспективность дополнительной терапии данных пациентов ингибиторами СОХ. В рамках исследования действия лекарственных средств (на примере метформина) в клеточных моделях нейровоспаления на первичных астроцитах крысы показано, что метформин способен эффективно ингибировать COX-путь и активировать LOX-путь биосинтеза оксилипинов, что открывает возможность нового направления регуляции клеточного ответа.

Заключение. Комплексная методология оценки изменения профилей оксилипинов позволяет улучшить интерпретацию получаемых данных и повысить эффективность поиска биомаркеров заболеваний, оценки действия лекарственных средств и изучения молекулярных механизмов патологий.

Цитохимическое исследование миелопероксидазы в диагностике острых лейкозов (Горбачева Д.В., Ярец Ю.И.)

Государственное учреждение «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», г. Гомель, Республика Беларусь

Harbachova D. V., Yarets Yu. I.

CYTOCHEMICAL STUDY OF MYELOPEROXIDASE IN THE DIAGNOSIS OF ACUTE LEUKEMIA

Миелопероксидаза (МПО) выявляется в клетках гранулоцитарного ряда в азурофильных гранулах, начиная с миелобласта. По мере созревания клеток активность фермента возрастает, в нейтрофилах выявляется наиболее высокая активность в виде гранул, заполняющих всю цитоплазму. Слабоположительная реакция на МПО наблюдается в небольшом количестве моноцитов в виде немногочисленных рассеянных гранул. В эритрокариоцитах, лимфоцитах, базофилах и мегакариоцитах МПО не определяется. Положительная реакция на миелопероксидазу характерна для острых миелоидных лейкозов. При М1 более 3% бластов обнаруживают активность МПО. При М2 количество бластных клеток, содержащих МПО, возрастает и может достигать 100% при М3. При острых лимфобластных лейкозах реакция на МПО является отрицательной.

Цель: определить вид острого лейкоза по наличию или отсутствию миелопероксидазы в бластных клетках у первичных пациентов с острыми лейкозами, направленных на обследование в ГУ «РНПЦ РМиЭЧ» в 2023 году.

Обследовано 42 пациента (возраст 13–70 лет) с острыми лейкозами (наличие бластных клеток в костном мозге более 20%, увеличение селезенки, лимфатических узлов). Материалом для исследования являлся аспират костного мозга, полученный с ЭДТА. Из образцов костного мозга были сделаны мазки. Принцип цитохимического метода определения миелопероксидазы основан на окислении бензидина в присутствии перекиси водорода в окрашенное нерастворимое соединение желтого цвета. Лабораторные исследования выполняли в клинико-диагностической лаборатории ГУ «РНПЦ РМиЭЧ».

У 27 пациентов с острым лейкозом была выявлена МПО в бластных клетках цитохимическим методом: бластные клетки окрасились в желтый цвет. Процент положительно окрашенных бластов составлял от 11% до 100% клеток, что говорит о наличии у этих пациентов острого миелобластного лейкоза. У 15 пациентов цвет бластов после окрашивания на МПО не изменился, что соответствует отрицательной реакции и острому лимфобластному лейкозу. Таким образом, частота впервые выявленых случаев острого миелобластного лейкоза с использованием цитохимического метода среди всей выборки пациентов (n=42) составила 64%, а острого лимфобластного лейкоза – 36%. Данные цитохимического исследования были подтверждены методом иммунофенотипирования – в образцах, положительных на миелопероксидазу были выявлены миелоидные маркеры, такие как CD33, CD117, CD13, миелопероксидаза. В отрицательных образцах выявлены лимфоидные маркеры, такие как CD19, CD20, CD22.

Заключение. Цитохимические исследования опухолевых клеток занимают важное место в дифференциальной диагностике гемобластозов. Они используются для установления варианта острого лейкоза и выявления особенностей метаболизма лейкозных клеток. Цитохимическая реакция определения МПО должна проводиться для первичной диагностики острых лейкозов.

Сывороточные уровни адипоцитокинов у пациентов с ранним ревматоидным артритом на фоне противоревматической терапии (Горбунова Ю.Н., Попкова Т.В., Авдеева А.С.)

ФГБНУ НИИР имени В. А. Насоновой, Москва, Россия

Gorbunova Yu. N., Popkova T. V., Avdeeva A. S.

SERUM LEVELS OF ADIPOCYTOKINES IN PATIENTS WITH EARLY RHEUMATOID ARTHRITIS ON THE BACKGROUND OF ANTIRHEUMATIC THERAPY

Жировая ткань рассматривается как высокоактивный эндокринный орган, продуцирующий большое количество различных адипоцитокинов (АЦК) (адипонектин, лептин, резистин, висфатин и др.), участвующих в патогенезе РА. Влияние противоревматической терапии на провоспалительные (лептин, резистин, висфатин) и противовоспалительные (адипонектин) адипоцитокины при РА неоднозначно.

Цель: оценить динамику АЦК (адипонектин, лептин, резистин, висфатин) в сыворотке крови больных ранним РА исходно и через 24 недели противоревматической терапии, сравнить исходные уровни АЦК в зависимости от достигнутой активности РА к 24 недели терапии.

Обследовано 47 пациентов с ранним РА (критерии ACR/EULAR, 2010), не получавших ранее противоревматическую терапию (ГК и БПВП), медиана возраста (25–75 процентиль) – 57 [46,5; 62,0] лет, продолжительность заболевания – 6,0 [5,5; 15,5] месяцев, серопозитивных по IgM РФ (87%) и АЦЦП (100%), с высокой активностью РА (DAS28 5,5 [5,1; 5,9] баллов). После включения в исследование все пациенты получали метотрексат (MT) (10 [10–15] мг/1 раз в неделю), через 12 недель при неэффективности МТ дополнительно назначался генно-инженерный биологический препарат (ГИБП): ингибитор-ФНО-α, адалимумаб 40 мг 1 раз в 2 недели. Концентрацию адипоцитокинов определяли иммуноферментным анализом (BioVendor, Brno, Czech Republic).

В целом по группе (n = 47) через 24 недели противоревматической терапии, сывороточный уровень адипонектина снижался на 47%, лептина и резистина увеличивался на 53% и 62% соответственно (р < 0,05 во всех случаях). Концентрация висфатина в сыворотке больных РА через 24 недели терапии повышалась на 37% статистически незначимо (р = 0,2) (таблица 1).

Таблица 1

Динамика АЦК у больных ранним РА исходно и через 24 недели терапии

В зависимости от достигнутой к 24-й недели терапии активности РА пациенты разделены на две группы: 1-я группа – с ремиссией/низкой активностью (n=24), 2-я группа – с умеренной/высокой активностью (n=23). У пациентов, достигших ремиссии/низкой активности РА к 24 недели комбинированной терапии исходное значение уровня лептина в сыворотке крови было достоверно ниже, чем у пациентов с сохраняющейся, несмотря на лечение, умеренной/высокой активностью заболевания (11,9 [5,1; 24,0] нг/мл против 27,0 [15,0;44,0] нг/мл, соответственно, p<0,05). Различий по уровню других адипоцитокинов получено не было (таблица 2).

Таблица 2

Исходные уровни адипоцитокинов, в зависимости от достигнутой активности РА к 24 недели терапии

Заключение. Через 24 недели эффективной противоревматической терапии сывороточный уровень адипонектина снижался, лептина и резистина увеличивался. Исходное значение уровня лептина в сыворотке крови у пациентов, достигших ремиссии/низкой активности РА к 24 недели комбинированной терапии было достоверно ниже, чем у пациентов с сохраняющейся активностью заболевания. Повышенный уровень лептина у пациентов с умеренной/высокой активностью РА, позволяет рассматривать его в качестве маркера не только метаболических нарушений, но и ревматоидного воспаления. При проведении противоревматической терапии необходим тщательный мониторинг метаболических нарушений (показателей липидного, углеводного и жирового обмена).

ANTI-HBc маркер вирусного гепатита у HBsAg-негативных доноров крови разных возрастов (Гринвальд Е.Н., Савчук Т.Н., Имашпаев Д.М., Абдрахманова С.А.)

РГП на ПХВ «Научно-производственный центр трансфузиологии» МЗ РК, г. Астана, Казахстан

Grinvald E. N., Savchuk T. N., Imashpayev D. M., Abdrakhmanova S. A.

ANTI-HBC MARKER OF VIRAL HEPATITIS IN HBSAG – NEGATIVE BLOOD DONORS OF DIFFERENT AGES

Достоверным признаком перенесенного вирусного гепатита В является наличие в крови антител к HBcAg вируса – anti-HBc. Данные антитела в организме появляются в ответ на внедрение вируса через некоторое время и сохраняются пожизненно, наличие анти-HBc является верным доказательством контакта организма с вирусом. Поэтому скрытое течение вирусной инфекции, возможное сохранение персистенции в гепатоцитах пациента, который перенес ВГВ, создает потенциальную опасность передачи вируса через гемотрансфузии, трансплантацию органов и гемодиализ. На базе Научно-производственного центра трансфузиологии (далее – НПЦТ) проводилось исследование по тестированию доноров г. Астаны на anti-HBc. По результатам исследования было принято решение об обязательном скрининге доноров на маркер anti-HBc.

Цель: анализ распространенности маркера anti-HBc в разных возрастных группах доноров крови.

Лабораторные исследования выполнялись методом иммунохемилюминесцентного анализа (ИХЛА) на анализаторе Architect i2000SR, Alinity i (АВВОТТ). Данные для статистического анализа получены из информационной системы «Infodonor».

За 2023 г. на anti-HBc было протестировано 43 169 HBsAg-негативных доноров. Антитела к ядерному антигену (anti-HBc) выявлены у 6086 (14,1%) доноров, отрицательных на поверхностный антиген ВГВ (HBsAg). Распространенность маркера anti-HBc в разных возрастных категориях доноров крови представлена в таблице. Отмечается большая разница по распространенности маркера у доноров более старшего возраста по сравнению с молодыми донорами. Маркер ВГВ (anti-HBc) встречается более чем у 36,5% доноров в возрасте 64–73 года и у 0,8% доноров в возрасте 18–23 года. Следует отметить, что в Республике Казахстан обязательная вакцинация против ВГВ всех новорожденных началась в 1998 г. Кроме того, молодые доноры по сравнению с более старшими в течение жизни получали меньше инвазивных процедур и имели меньше контактов, которые могли привести к инфицированию вирусным гепатитом В (таблица).

Распространенность маркера anti-HBc среди доноров в зависимости от возраста

Заключение. Распространенность anti-HBc среди доноров старшего возраста значительно больше, чем у молодых, получивших вакцину против ВГВ, что подтверждает о предпочтительном привлечении в ряды доноров молодых людей от 25 лет и моложе.

Ревматоидный фактор IgA типа в повышении специфичности тестирования ревматоидного артрита у пациентов Гомельской области (Гусакова Н.В., Петренко Т.С.)

Учреждение «Гомельская областная клиническая больница», г. Гомель, Республика Беларусь

Husakova N. V., Petrenko T. S.

RHEUMATOID FACTOR IGA TYPE IN ENHANCED SPECIFICITY OF TESTING RHEUMATOID ARTHRITIS IN THE GOMEL REGION PATIENTS

Ревматоидный фактор (РФ) рассматривают как гетерогенную группу антител (аутоантитела IgM, IgA и IgG классов), реагирующих с Fc-фрагментом IgG. Определение классического РФ, выявляющее преимущественно аутоантитела IgM типа, представляет собой один из диагностических критериев ревматоидного артрита (РА) (классификационные критерии РА ACR/EULAR, 2010 г.). В то же время положительный тест на РФ демонстрирует низкую диагностическую специфичность, т. к. может обнаруживаться у пациентов с другими аутоиммунными заболеваниями, злокачественными новообразованиями, хроническими инфекционно-воспалительными процессами, в пожилом возрасте.

Цель: оценка специфичности серологического тестирования РА у пациентов Гомельской области при одновременном определении РФ изотипа IgA в дополнение к РФ IgM.

Определение РФ изотипа IgA и IgM было проведено у 73 пациентов (53 женщины, 20 мужчин, средний возраст 44 ± 15,5 года) с ранее установленным диагнозом РА (средняя длительность заболевания 28 ± 9 мес.), проходивших лечение в ревматологическом отделении Учреждения «Гомельская областная клиническая больница». Диагноз РА верифицирован в соответствии с критериями ACR/EULAR (2010 г.). РФ изотипа IgA определяли иммуноферментным методом, РФ изотипа IgM – методом латекс-агглютинации.

У лиц с РА серопозитивных по РФ изотипа IgM (n = 49), частота обнаружения РФ изотипа IgA составила 77% (n = 38), при этом обращало на себя внимание, что у около половины РФ-негативных по изотипу IgM пациентов с РА в 54% (n = 13) случаев обнаруживался РФ класса IgA.

Заключение. Определение ревматоидных факторов разных классов, в частности РФ изотипа IgA, может не только повысить специфичность тестирования, но и при правильной интерпретации, уточнить вариант течения и прогноз заболевания. Следует отметить, что истинная ценность обнаружения повышенного уровня РФ изотипа IgA требует уточнения, что возможно при целенаправленном изучении больших когорт пациентов с РА.

Значимость применения маркеров опухолевого роста СА19-9, СЕА и СА 72-4 в диагностике злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта (Гуськова Н.К., Фоменко Ю.А., Целищева И.В., Ноздричева А.С., Коновальчик М.А., Селютина О.Н., Гуськова Е.А., Бараненкова М.А.)

Гуськова Н. К.¹, Фоменко Ю. А.¹, Целищева И. В.¹, Ноздричева А. С.¹, Коновальчик М. А.¹, Селютина О. Н.¹, Гуськова Е. А.², Бараненкова М. А.³

¹ ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» Минздрава Российской Федерации, г. Ростов-на-Дону

² Клинико-диагностический центр «ДАВИНЧИ», г. Ростов-на-Дону

³ ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» МЗ РФ, г. Ростов-на-Дону

Guskova N. K., Fomenko Yu.A., Tselishcheva I. V., Nozdricheva A. S., Konovalchik M. A., Selyutina O. N., Guskova E. A., Baranenkova M. A.

THE SIGNIFICANCE OF THE USE OF TUMOR GROWTH MARKERS CA19-9, CEA AND СА 72-4 IN THE DIAGNOSIS OF MALIGNANT NEOPLASMS OF THE GASTROINTESTINAL TRACT

Цель: анализ значимости применения опухолевых маркеров СА19-9, СЕА, СА 72-4 в диагностике злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта.

В исследование включены 335 пациентов с установленным диагнозом злокачественное новообразование (ЗНО) поджелудочной железы (РПЖ) – 37 чел., желудка (РЖ) – 40 чел., прямой кишки (РПК) – 126 чел., толстой кишки (РТК) – 132 чел. На этапе обследования до начала лечения в крови всех пациентов проведены исследования содержания СА19-9, СЕА и у больных РЖ – СА 72-4 методом электрохемилюминесценции. Данные оценивались в программе IBM SPSS Statistics 23.0.

Повышенный уровень СА19-9 имели 70% (n = 26) больных РПЖ, у 30% (n = 11) значения не выходили за пределы порогового уровня, то есть были меньше 39 Е/мл. При этом у 50% (n = 13) из 26 уровень СА19-9 превышал 1000,0 Е/мл, у остальных 13 находился в пределах от 51 до 924 Е/мл. Повышение уровня СЕА отмечено у 46% (n = 12) больных РПЖ, а у 53% (n = 25) уровень СЕА был ниже 5,2 нг/мл. Обращало внимание, что из 13 пациентов с уровнем СА19-9 больше 1000 Е/мл 69,2% (n = 9) пациентов имели повышенный СЕА: 3 с уровнем СЕА > 1000 нг/мл, 6 – от 23 до 1000,0 нг/мл, а у 4 – меньше 5 нг/мл. При РЖ, РПК и РТК повышение уровня СА19-9 отмечено у 22% (n = 9), 13% (n = 17) и 14% (n = 19) больных, соответственно. Повышение содержания СЕА установлено, соответственно при РЖ у 20% (n = 8) пациентов, при РПК – у 26% (n = 33) и РТК – у 30% (n = 40). При указанных локализациях уровень СА19-9 выше 1000 Е/мл установлен только в 1 случае при РЖ, в 1 – при РПК, в 4 – при РТК, уровень СЕА более 1000 нг/мл только у 1 больного РЖ и у 3 – РТК. Показательны результаты исследования уровня СА 72-4 у больных РЖ, повышенные уровни которого выявлены в 52% (n = 21) случаев.

Заключение. Использование опухолевого маркера СА19-9 совместно с СЕА может быть применимо в диагностике РПЖ и РЖ, а при РПК и РТК они могут быть отнесены к вспомогательным методам диагностики, поскольку у значительного числа больных с подтвержденным диагнозом повышение концентрации исследуемых маркеров не отмечено.

Исследование уровня интерлейкина 17А при COVID-19 (Давыдова Н.В., Путков С.Б., Казаков С.П.)

Давыдова Н.В.¹, Путков С.Б.¹, Казаков С.П.^1,2

¹ ФГБУ «Главный военный клинический госпиталь имени академика Н. Н. Бурденко» Министерства обороны РФ, г. Москва

² ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий ФМБА», г. Москва

Davydova N.V., Putkov S.B., Kazakov S.P.

THE STUDY OF INTERLEUKIN 17A LEVELS IN COVID-19

Цель: сравнительное исследование уровня интерлейкина 17А (ИЛ-17A) у пациентов с разной степенью тяжести COVID-19, корреляции с уровнем интерлейкина 6 (ИЛ-6).

Биоматериал (сыворотка крови) 83 пациентов 29–88 лет собран в период с мая 2020 г. по июль 2021 г. (уханьский, альфа- и дельта-штаммы). Выполнялось количественное определение уровня ИЛ-6 и ИЛ-17A, использовались наборы реагентов зарубежных производителей для определения ИЛ-17A методом ИФА («Human», Thermofisher, США) и для автоматического определения ИЛ-6 на анализаторе («Cobas e411», Roche, Швейцария).

Пациенты делились на группы в зависимости от уровня ИЛ-6: < 7 пг/мл – 1 группа (n = 25 человек), > 7 – < 100 пг/мл – 2 группа (n = 11 человек), > 100 пг/мл – 3 группа (n = 47). Средний уровень ИЛ-6 (M ± m) в 1 группе – 2,3 ± 0,222 пг/мл, во 2 группе – 29,4 ± 6,3 пг/мл, в 3 группе – 3549 ± 1836 пг/мл. Выявлены достоверные отличия по критерию U Манна–Уитни (р < 0,0001) между всеми группами по уровню ИЛ-6.

Средний уровень ИЛ-17А (M ± m) в 1 группе – 3,8 ± 2,3 нг/мл, во 2 группе – 2,7 ± 0,93 нг/мл, в 3 группе – 7,2 ± 2,7 нг/мл. Достоверных отличий между 1 и 2 группой не обнаружено (p = 0,435). Между 2 группой пациентов при ИЛ-6 менее 100 пг/мл и 3 группой при ИЛ-6 более 100 пг/мл средний уровень ИЛ-17А составил соответственно 2,7 нг/мл и 7,2 нг/мл, отличия недостоверны (р = 0,936). Тем не менее обнаруживается тенденция к повышению уровня ИЛ-17A у пациентов 3 группы на фоне развития «цитокинового шторма».

Значимые корреляции по Спирмену между уровнем ИЛ-6 и ИЛ-17А выявлены в 3 группе при уровне ИЛ-6 более 100 пг/мл (r_s = 0,484, p = 0,001). Внутри групп 1 и 2 корреляции по уровням этих цитокинов обнаружены не были.

Пациенты из групп 1 и 2 выжили в 100%, в 3 группе наблюдался летальный исход в 36% случаев (21,7% от всех пациентов). Средний уровень ИЛ-17А (M ± m) у выживших – 5,85 ± 2,1 нг/мл, ИЛ-6 (M ± m) – 679 ± 169 пг/мл, у умерших – ИЛ-17А – 4,65 ± 1,7 нг/мл, ИЛ-6–6835 ± 4745 пг/мл. Отличия по уровню ИЛ-6 достоверны (р < 0,0001).

Заключение. Выявлено сочетанное повышение уровней ИЛ-6 и ИЛ-17А в 3 группе, ассоциированное с плохим исходом заболевания COVID-19. Отмечается характерная тенденция повышения уровня ИЛ-17А у пациентов с COVID-19 (при норме менее 0,1 нг/мл) в группе с низкими концентрациями ИЛ-6, незначительное его снижение в группе со средним уровнем ИЛ-6 и значительный рост ИЛ-17А в группе пациентов с развившимся «цитокиновым штормом». Повышение ИЛ-6 в группе с пациентов с «цитокиновым штормом» коррелирует с повышением ИЛ-17А и является фактором плохого прогноза.

Интерпретация результатов иммуногематологического исследования. Разбор клинического случая (Демкова О.В., Галыго Н.В.)

ГБУЗ «Иркутская Областная ордена «Знак Почета» клиническая больница», г. Иркутск

Demkova O. V., Galygo N. V.

INTERPRETATION OF RESULTS OF IMMUNOHEMATOLOGICAL STUDIES. CLINICAL CASE ANALYSIS

Иммуногематологические исследования, включая скрининг и идентификацию антиэритроцитарных антител, являются необходимым исследованием перед проведением трансфузий эритроцит-содержащих компонентов крови. Детальное обследование и разбор каждого сложного случая способствуют наиболее точному подбору совместимых для реципиента донорских компонентов крови, что снижает риск развития посттрансфузионных реакций и осложнений.

Цель: определение антигенов систем АВО, антигенов системы Резус и антигена К1 системы Kell, скрининг и идентификация антиэритроцитарных антител, интерпретация полученного результата.

Клинический случай: ребенок, возраст 2 дня, отделение кардиохирургии № 2, диагноз «Другие врожденные аномалии аорты». Предварительное определение группы крови пациента: А(II). Гемотрансфузии не получал. При подтверждающем определении перекрестным методом с моноклональными антителами определяется A(II), с цоликлоном анти-А1 (лектином) агглютинация отсутствует (A2(II) подгруппа). Дальнейшее обследование проводим в диагностических картах фирмы GRIFOLS:

1. Определение антигенов систем АВО, антигенов системы Резус и антигена К1 системы Kell. Интерпретация результата: А(II) Rh + положительный ccDEeK-.

2. Скрининг антиэритроцитарных антител в картах DG Gel Anti-IgG с использованием стандартных эритроцитов (4-клеточная панель Serascan Diana 4). Интерпретация результата: антиэритроцитарные антитела не выявлены.

3. Определение прямой пробы Кумбса в картах DG Gel Coombs. Интерпретация результата: прямая проба Кумбса отрицательная.

4. Типирование в картах DG Gel Neutral: с моноклоном анти-Н агглютинация отсутствует. Интерпретация результата: у ребенка антиген А (не подгруппа).

5. Определение иммунных анти-А1 антител в картах DG Gel Coombs. Интерпретация результата: иммунные анти-А1 антитела выявлены. Известно, что у матери ребенка группа крови О(I) (возможности обследовать мать ребенка не было). Предположительно, иммунные анти-А1 антитела, обнаруженные у ребенка, являются материнскими.

6. Проведение пробы на индивидуальную совместимость компонентов крови в картах DG Gel Coombs с донорскими эритроцитами группы А(II) и O(I). Интерпретация результата: кровь реципиента не совместима с донорскими эритроцитами группы А(II) и совместима с донорскими эритроцитами группы О(I).

Заключение. Для предотвращения посттрансфузионных осложнений у детей необходимо полное иммуногематологическое обследование.

Клинический случай дифференцированного подхода к диагностике гемолитической болезни новорожденного по системе АВО (Дикая Т.В., Козлякова О.В., Климович О.В., Артюшевская М.В., Сухарева А.П.)

Дикая Т. В.¹, Козлякова О. В.¹, Климович О. В.¹, Артюшевская М. В.², Сухарева А. П.³

¹ Городской центр трансфузиологии учреждения здравоохранения «6-я городская клиническая больница», г. Минск, Республика Беларусь

² Институт повышения квалификации и переподготовки кадров здравоохранения Учреждения образования «Белорусский государственный медицинский университет», г. Минск, Республика Беларусь

³ Учреждение здравоохранения «Клинический родильный дом Минской области», г. Минск, Республика Беларусь

Dikaya T. V., Kozliakova O. V., Klimovich O. V., Artjushevskaya M. V., Sukhareva A. P.

CLINICAL CASE OF A DIFFERENTIATED APPROACH TO THE DIAGNOSIS OF ABO NEWBORN’S HEMOLYTIC DISEASE

Цель: представить результаты диагностики гемолитической болезни новорожденного (ГБН) неуточненного генеза.

Иммуногематологические исследования (ИГИ) позволяют, наряду с прямым антиглобулиновым тестом (АГТ), использовать непрямой АГТ, как более чувствительный к материнским аллоантителам в крови новорожденного ребенка. Метод тепловой элюции антител с поверхности эритроцитов с последующим проведением реакции агглютинации предлагается в качестве дополнительного исследования.

Женщина Ш., 1986 года рождения, наблюдалась по беременности. В анамнезе вторичное бесплодие и 3 выкидыша. При ИГИ было установлена О(I) группа крови, RhD-отрицательная принадлежность, Rh-фенотип: Ccddee K-отрицательная. В 28 недель беременности был введен иммуноглобулин человека анти-D. Повторно иммуноглобулин человека анти-D был введен после родов в первые сутки после рождения ребенка. Доношенный мальчик родился от 1-х родов путем операции кесарева сечения в сроке 267 дней с массой тела 3680 грамм, ростом 52,0 сантиметра в удовлетворительном состоянии. Общий билирубин в биохимическом анализе крови сразу после рождения в пределах возрастной нормы. К концу 1-х суток у ребенка отмечается развитие гипербилирубинемии, анемии. Прямой АГТ тест у ребенка показал положительный результат.

Для уточнения диагноза и определения рисков гемолиза проведено параллельное ИГИ исследование образца матери и новорожденного ребенка. ИГИ образца матери и новорожденного проводили на автоматическом анализаторе IH-500. ИГИ матери включали: определение группы крови по системе АВО; определение Rh-фенотипа, включая типирование эритроцитов системы Kell (K); скрининг и идентификация аллоиммунных антиэритроцитарных антител. Выполнялось автоматическое определение титров антител по системе АВО (анти-А и анти-В): нормальных (естественных) полных антител класса IgM методом агглютинации в геле (ID-карты NaCl, Enzyme Test and Cold Agglutinins) и иммунных неполных антител класса IgG (с использованием ID-карт Coombs Anti–IgG). ИГИ образца новорожденного включали определение антигенов по системам ABO/Rh и Kell (K); проведение прямого АГТ теста полиспецифического и моноспецифического (для выявления классов иммуноглобулинов IgM, IgG). Определение рисков гемолиза проводилось в ID-картах DAT IgG–Dilution, а в ID-картах DAT IgG1/IgG3 – определение субклассов иммуноглобулинов IgG1 и IgG3. Сыворотку новорожденного дополнительно исследовали на наличие группоспецифических аллоантител анти-В в непрямом АГТ. Диагноз ГБН, обусловленная АВО несовместимостью, был установлен на основании ИГИ образца матери, которые продемонстрировали наличие в сыворотке АВО антител, направленных против антигенов новорожденного (мать О(I) – новорожденный В(III)). Сыворотка матери содержала дополнительно анти-D антитела (которые присутствовали после введения иммуноглобулина человека анти-D) и группоспецифические антитела анти-А и анти-В (иммуноглобулины IgM анти-А 1:64, анти-В 1:256 и иммунные антитела IgG анти-В в титре 1:16). Элюат с эритроцитов плода содержал анти-В антитела (группоспецифические антитела, иммуноглобулины IgG). При лабораторном исследовании рисков гемолиза не выявлено. Это может быть связано с тем, что уровень IgG3 слишком низок для детекции в иммуногематологических тестах, однако он может быть достаточным для развития гемолиза. В педиатрическом отделении ребенку проводилось введение внутривенного иммуноглобулина (однократно), фототерапия (6 часов), назначены фолиевая кислота и витамин D₃. Выписан в удовлетворительном состоянии на 19-е сутки жизни.

Заключение. Анализ элюатов обладает более высокой чувствительностью в определении анти-А и анти-В антител по сравнению с прямым антиглобулиновым тестом, что позволяет его использовать дополнительно при определении типа ГБН. Совокупные результаты как прямого, так и непрямого антиглобулинового теста, исследование эллюата у новорожденного в сочетании с другими клинико-лабораторными показателями гемолиза (повышение концентрации билирубина, снижение гемоглобина и др.) существенно помогают в ранней диагностике и прогнозировании течения ABO-ГБН.

Нормативно-правовые аспекты лабораторного обеспечения медицинской помощи (Долгих Т.И., Левашова О.А., Дружинина Т.А., Сысоева А.С., Глотова Е.В.)

Пензенский институт усовершенствования врачей – филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, г. Пенза

Dolgikh T. I., Levashova O. A., Druzhinina T. A., Sysoeva A. S., Glotova E. V.

REGULATORY AND LEGAL ASPECTS OF LABORATORY SUPPORT OF MEDICAL CARE

Повышенное внимание специалистов в области лабораторной медицины к вопросам нормативно-правового регулирования обусловлена прежде всего быстрым изменением требований в данной сфере. Своевременная интеграция нормативных правовых актов в работу лабораторий является неотъемлемой частью управления деятельностью медицинских учреждений независимо от их формы собственности. Систематические изменения и дополнения вносятся как в Федеральный закон от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» (в 2020 г. – 12, в 2021 г. – 8, в 2022 г. – 10, в 2023 г. – 6 изменений), так и в другие сопряженные с ним законы и подзаконные акты. В формате цифровизации здравоохранения базы данных постоянно пополняются сведениями о медицинских и фармацевтических организациях, о лицах, которые участвуют в осуществлении медицинской деятельности и/или обучаются по образовательным программам среднего профессионального и высшего медицинского образования, а также сведения статистического наблюдения в сфере здравоохранения.

Цель: рекомендации по программам профессиональной переподготовки и повышения квалификации для лиц с высшим медицинским и немедицинским образованием.

Особенностью лабораторной службы нашей страны является кадровая составляющая, которая представлена на 38,6% специалистами с высшим немедицинским (чаще биологическим) образованием. Это влечет за собой дополнительное регулирование в отношении данной категории специалистов высшего звена и напрямую связано с их допуском к работе в рамках лицензионных требований (постановление Правительства РФ от 01.06.2021 № 852 «Об утверждении Положения о лицензировании медицинской деятельности…»). Для получения лицензии и мониторинга выполнения требований в виде электронного документа организации необходимо прилагать документы, подтверждающие наличие у лиц соответствующего образования и пройденной аккредитации специалиста (или сертификатов специалиста), либо копия договора с организацией, имеющей лицензию на осуществление соответствующей деятельности.

Процедура аккредитации проводится в соответствии с приказом Минздрава России от 28.10.2022 № 709н «Об утверждении Положения об аккредитации специалистов» с учетом требований приказа Минздрава России от 02.05.2023 № 206н «Об утверждении Квалификационных требований…» (для специалистов высшего звена). Аккредитация и аттестация специалистов с немедицинским образованием проводится по должностям, предусмотренных номенклатурой должностей (приказ Минздрава от 02.05.2023 № 205н).

Переход к процедуре аккредитации специалистов осуществляется поэтапно по 31.12.2025 включительно (сертификаты специалистов прекратят свое действие). В соответствии с постановлением Правительства РФ от 01.06.2021 № 852 для выполнения работ по: клинической лабораторной диагностике, лабораторной генетике, медицинской микробиологии, лабораторной диагностике требуются сотрудники, прошедшие аккредитацию. Возникает вопрос: врачам (биологам) работающим к клинико-диагностических лабораториях, нужна ли подготовка по медицинской микробиологии? Обратим внимание на требование постановления № 852 о выполнении «Правил проведения лабораторных исследований» (утверждены приказом Минздрава России от 18.05.2021 № 464н, согласно которым предметом клинико-диагностических и микробиологических исследований является биологический материал человека и используются одинаковые технологии: микроскопические, иммунологические (включая серологические), молекулярно-биологических (молекулярно-генетические). Это обосновывает подготовку врачей клинической лабораторной диагностики и биологов, использующих эти технологии, по медицинской микробиологии (получение новой специальности возможно только через профессиональную переподготовку или ординатуру с процедурой первичной специализированной аккредитации).

Заключение. Для приведения деятельности клинико-диагностических и микробиологических лабораторий в соответствие с современными требованиями необходимо увеличение учебных баз для профессиональной переподготовки по медицинской микробиологии и аккредитационных центров. Требуются утвержденные в установленном порядке отдельные программы профессиональной переподготовки и повышения квалификации для лиц с высшим медицинским и немедицинским образованием. Такой подход реализуется в Пензенском институте усовершенствования врачей – филиале ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России при подготовке врачей клинической лабораторной диагностики, биологов (врачей-лаборантов), медицинских микробиологов с использованием баз ведущих учреждений здравоохранения Пензенской области.